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VALUTAZIONE DELLA PRESENZA DEL VIRUS DELL’EPATITE E (HEV) IN UN ALLEVAMENTO A CICLO CHIUSO DEL NORD ITALIA / EVALUATION OF THE PRESENCE OF HEPATITIS E VIRUS (HEV) IN A FARROW-TO-FINISH HERD IN NORTHERN ITALY
No full textIl virus dell’epatite E (HEV) è un virus a RNA, unico membro della famiglia Hepeviridae.
Nei Paesi in via di sviluppo l’infezione è endemica e si trasmette per via oro-fecale attraverso
il consumo di acqua contaminata. Nei Paesi industrializzati la malattia è considerata una
zoonosi emergente, correlata al consumo di prodotti contaminati a base di carne e/o fegato di
suino o cinghiale, crudi o poco cotti. I suidi domestici e selvatici sono considerati i principali
reservoir di HEV nei Paesi industrializzati dal momento che i ceppi da essi isolati sono
fi logeneticamente correlati con quelli umani. La prevalenza di allevamenti infetti è elevata sia
in Italia sia in altri Paesi. Nei suini l’infezione da HEV decorre in modo asintomatico e quindi
non vi è interesse economico nel tentare di controllarla. L’obiettivo dello studio è stato quello
di indagare la presenza di HEV in un allevamento di suini del nord-Italia, mai esaminato in
precedenza. Nell’arco di un anno sono stati raccolti 59 campioni fecali da animali di differenti
fasce d’età e 3 pool di emosieri testicolari (PF). I campioni fecali sono stati analizzati tramite
RT-PCR al fi ne di rilevare il genoma virale mentre nei PF sono stati ricercati anticorpi anti-
HEV utilizzando un kit ELISA. I risultati ottenuti mostrano una situazione atipica all’interno
dell’allevamento dove, a fronte di una sieropositività fra le scrofe, l’RNA virale non è stato
messo in evidenza nei campioni fecali degli animali di tutte le fasce d’età. Alla luce di questi
risultati sono state discusse tre diverse ipotesi: una falsa positività al test ELISA, una bassa
prevalenza di animali eliminatori o un’effettiva circolazione di HEV limitata alle scrofe con
successiva eradicazione del virus. L’ipotesi più probabile sembra essere l’ultima ma questo
pone ulteriori interrogativi sulla reale prevalenza di HEV negli allevamenti, così come sulla
sua epidemiologia.Hepatitis E virus (HEV) is an RNA virus, the only member of the Hepeviridae family. In
developing countries, the infection is endemic and is transmitted via the faecal-oral route
through the consumption of contaminated water. In industrialized countries the disease is
an emerging zoonosis, related to the consumption of contaminated raw or undercooked
meat and/or liver products of pig or wild boar. In developed counties, domestic and wild
pigs are considered the main reservoirs of HEV since the strains isolated from them are
phylogenetically correlated with human ones. The prevalence of infected farms is high both
in Italy and in other countries. In pigs, HEV infection is asymptomatic and therefore farmers
have no economic interest in trying to control it. The aim of the study was to investigate the
presence of HEV inside a pig farm in Northern Italy, never examined previously. Over a
year, 59 faecal samples (individual and pooled) were collected from animals of different age
groups and three processing fl uids (PF) taken at the time of castration. Faecal samples were
analysed by RT-PCR in order to detect the viral genome while anti-HEV antibodies were
detected in PF using a commercial ELISA kit. The results obtained show an atypical situation
inside the farm where the sows are anti-HEV positive in PF while the search for viral RNA
in the stool samples has given negative results in all age groups. On the basis of these results,
three different hypotheses have been formulated: a false positivity to the ELISA test, a low
prevalence of infected animals or a circulation of single HEV in sows. The most probable
hypothesis seems to be the last but this raises further questions on the real prevalence of HEV
in farms, as well as on its epidemiology
DETECTION OF HEPATITIS E VIRUS IN SWINE LIVER SAUSAGE, IN ITALY
No full textHepatitis E is an infectious disease caused by a small RNA virus (Hepatitis E Virus, HEV), which can cause acute hepatitis in humans. Four mammalian HEV genotypes are known, among which g3 and g4 are considered zoonotic. In developed countries, hepatitis E cases were mostly associated with travelling in endemic areas. However, recently autochthonous cases have been increasingly reported in developed country, including Italy. In Italy, g3 strains have been detected in swine, in both farms and slaughterhouses, with prevalence that can reach 50% (2,3). Swine strains often share a high nucleotide identity with HuHEV. During the last 10 years, hepatitis E cases have been correlated with consumption of swine, wild boar and deer meat or organs (particularly liver) consumed raw or undercooked, worldwide (1). In this study, we investigated the presence of HEV in liver sausage, which is often consumed raw or undercooked in Italy. In 2012, 4 packages (300 gr) of pork liver sausages were bought at a butcher shop. Sausages were chopped in 45 slices (250 mg each) and spiked with Murine Norovirus (MNV). After RNA extraction, samples were analyzed by RT‐PCR for MNV detection (extraction process control). Samples positive for MNV were then analyzed for HEV and Porcine Adenovirus (PAdV as index virus of fecal contamination) by real‐time RT‐PCR and real‐time PCR, respectively. Positive samples were further analyzed by RT‐PCR with specific primers for two different genomic regions (ORF1 and ORF2). Two out of 45 samples (4.4%) were positive for HEV. Moreover both samples were positive for HEV ORF1, and one was also confirmed in ORF2. This result suggests different sensitivity of the two PCR protocols. Sequence analysis confirmed the presence of swine g3 HEV strains in both samples. One sausage sample was positive for HEV and PAdV, suggesting that also HEV presence could be related to fecal contamination of pork liver. Attempts to infect A549 cells with a homogenate from a HEV and PAdV positive liver sausage were unsuccessful. This study confirms that pig liver sausage can be contaminated with HEV, which might at least partially reflect fecal contamination of pork meat and liver during improper slaughtering practice. Further studies to investigate residual HEV infectivity in pork are neede
Antigenicity of a recombinant capsid protein from an Italian swine HEV strain
No full textHepatitis E virus (HEV) is a single-stranded, positive-sense RNA virus. The genome contains three ORFs, of which ORF2 encodes the major structural capsid protein PORF2. HEV is responsible for sporadic infections as well as large epidemics of acute viral hepatitis in developing countries, and is emerging in industrialized areas where it accounts for an increasing number of sporadic cases. Recent observations of indigenous cases in developed regions suggest that pigs may act as a zoonotic source and reservoir of infection. This hypothesis is also supported by the high genetic similarity between human and swine HEV strains circulating in the same geographical areas. In 2006, we investigated the presence of HEV in swine farms in Northern Italy. The results of molecular diagnosis indicated a wide presence of genotype 3 HEV strains, the genotype predominating in pigs in industrialized areas. We expressed a 111-aa deletion fragment of the capsid protein PORF2 of an Italian swine HEV strain in a recombinant baculovirus system using Sf9 insect cells. The 55 kDa recombinant PORF2 did not self-assemble as virus-like particles in insect cells, but was produced at high levels in the cytoplasm and supernatant of cells, as demonstrated by immunocytochemical (ICC) staining and by Western blotting (WB) with immune animal sera. The PORF2 protein was used to produce hyperimmune sera and a panel of monoclonal antibodies (MAbs), which were selected by ELISA. The results
showed that the expressed HEV protein is immunogenic and is specifically recognized by MAbs using different assay, including WB and ICC. Further study are being conducted to characterize the MAbs and PORF2
Identificazione di ceppi di Sapovirus e Norovirus in suini asintomatici in allevamenti dell’Emilia Romagna
No full textNorovirus e sapovirus sono due membri della famiglia Caliciviridae. Essi presentano un genoma a RNA monocatenario e sebbene l'organizzazione genomica vari tra i due generi, entrambi codificano per le proteine non strutturali (inclusa la RNA polimerasi RNA dipendente), per la proteina capsidica principale e per una proteina le cui funzioni restano sconosciute. I NoV e SaV sono la seconda causa di ricovero ospedaliero per gastroenterite (GE) pediatrica e i NoV da soli sono responsabili di oltre il 50% delle epidemie di GE
nell'adulto. NoV e SaV infettano anche animali domestici e da reddito, e in particolare suini e bovini sono potenziali serbatoi di infezione per l'uomo. Durante il primo semestre del 2006 e del 2008, 201 campioni fecali sono stati prelevati da altrettanti suini sani provenienti da 23 allevamenti localizzati nella regione Emilia-Romagna. I campioni fecali sono stati analizzati per la ricerca di norovirus e sapovirus mediante un saggio di trascrizione inversa e PCR utilizzando la coppia di primer p289-p290, amplificando una regione conservata all'interno dell'RNA polimerasi RNA dipendente (RdRP)). Il metodo permette di individuare sia ceppi di sapovirus (PEC) che di norovirus suini. L'RNA proveniente da tredici campioni fecali suini è risultato positivo al test di RT-PCR, mostrando una banda di DNA delle dimensioni attese (≈319bp per norovirus e 319bp per PEC). Per confermare i risultati ottenuti e caratterizzare i ceppi coinvolti, sei campioni positivi sono stati sequenziati. L'analisi delle sequenze ottenute ha confermato che cinque ceppi appartenevno al genere sapovirus e hanno mostrato un'identità di sequenza nucleotidica tra il 79% e l'85% con altri ceppi suini descritti in Europa. Uno dei ceppi sequenziati è invece risultato appartenere ai norovirus, in particolare al tipo GII.18 che sebbene appartenente allo stesso genogruppo dei ceppi umani di norovirus è un genotipo comune, ad oggi, per i soli ceppi suini. Lo studio
condotto, se pur preliminare, ha mostrato una prevalenza del 13% (tra NoV e SaV) in suini sani. Nel suino sembra più comune la presenza di sapovirus. L'analisi di sequenza ha mostrato che i ceppi di PEC e NoV individuati sono correlati e vicini geneticamente ai ceppi umani. Sebbene non dimostrata, la possibile origine zoonotica non può essere esclusa. Ulteriori studi saranno condotti per caratterizzare i ceppi identificati, consentendo di avere un quadro
filogenetico più completo
Ricerca di Torque Teno Virus (TTV) in suini allevati in Italia
No full textI Torque Teno Virus (TTV) appartengono ad un genere di ancora
incerta classificazione definito Anellovirus. I TTV sono stati messi in evidenza per la prima volta nell’uomo nel 1997, in un paziente con epatite post-trasfusionale ad eziologia sconosciuta. Recentemente, TTV non distinti geneticamente da quelli messi in evidenza nell’uomo sono stati riscontrati anche negli animali, suini inclusi. Il presente lavoro ha avuto lo scopo di stimare la prevalenza dell’infezione da TTV in allevamenti italiani di suini e valutare i possibili fattori di rischio relativi all’infezione. Campioni di siero prelevati da 179 suini clinicamente sani di 10 aziende situate in Italia Centro-Settentrionale sono stati esaminati mediante PCR per la ricerca del DNA di TTV. DNA virale è stato evidenziato nel siero di
43 suini (24%), provenienti da 8 dei 10 allevamenti esaminati. La prevalenza è risultata essere significativamente più elevata nelle aziende da ingrasso (40,1%) che in quelle da riproduzione-ingrasso (11%) e non correlata alle dimensioni aziendali. Negli allevamenti da ingrasso, la prevalenza è risultata significativamente più elevata nei magroni (57,4%) che nei grassi (22,9%), ma tale differenza non è stata osservata negli allevamenti da riproduzione-ingrasso.
L’implementazione di alcune misure di profilassi igienico-sanitaria e di biosicurezza, valutate nel presente studio, non sembra essere in relazione con la prevalenza di TTV
PCR detection of swine Anellovirus in italian pig herds
No full textAnellovirus is a recently created, floating genus of viruses. The type species, Torque teno virus (TTV), was discovered in a human patient affected by hepatitis of unknown origin. Viruses related to human TTVs have been identified in non-human primates, swine, bovine, ovine, chicken, feline, and canine. Porcine TTVs have similar genomic organization with human TTVs, but share less than 45% nucleotide sequence identity. The objective of this study was to evaluate the presence of anelloviruses in Italian swine herds.
89 serum samples and 16 faecal samples from 5 different farms and 27 meat juices from 2 different slaughter houses were tested using a PCR technique with primers targeting two conserved domains within an untraslated region of the viral genome. Amplified products were visualized on a 2% agarose gel. To confirm their identity some positive products were analyzed by nucleotide sequencing.
Porcine anellovirus DNA was detected in 21 of 89 (23.6%) serum samples, and in 5 of 27 (18.5%) meat juices. All faecal samples were negative. The frequency of positive pigs varied from farm to farm, and was generally higher in young animals. For strains of different farms similar sequences were observed. Nucleotide analysis of these sequences revealed a certain homology with Brazil and Japan anellovirus swine strains.
Here we report the first molecular survey assessing the presence of anellovirus in Italian pig farms.
Although anelloviruses are not known to be associated with any swine diseases, co-infection with other swine pathogens may result in enhanced disease. Furthermore, the potential inoculum carried out by pigs should be further evaluated as a sanitary threat for human being
L’epatite E negli animali e nell’uomo. Seconda parte: la situazione nei suidi domestici e selvatici in Italia
No full textLa conoscenza dell’epidemiologia di HEV negli allevamenti suinicoli e nelle popolazioni di cinghiale italiane è una premessa indispensabile per valutare se, anche nel nostro Paese, esistono ragionevoli possibilità di trasmissione dell’infezione all’uomo e se, quindi, possano essere necessarie delle misure sanitarie per la tutela dei consumatori, degli addetti al settore e delle produzioni suinicole. Nella seconda parte dell’articolo, vengono presentate, in sintesi, alcune recenti informazioni relative alla diffusione di HEV nei suidi italiani emerse dall’attività del nostro gruppo di ricerca
Torque Teno Virus (TTV) nel suino: conoscenze attuali e prospettive future
No full textI Torque Teno Virus (TTV) sono piccoli virus a DNA circolare messi in evidenza per la prima volta nell’uomo nel 1997, e tuttora non correlati con certezza a nessuna patologia specifica. TTV geneticamente simili a quelli identificati nell’uomo sono stati descritti anche in animali da reddito, selvatici, da compagnia e in primati non umani. TTV sono stati identificati anche nel suino, ma allo stato attuale delle conoscenze, la presenza e la prevalenza di tali virus negli allevamenti suini a livello mondiale è stata scarsamente investigata. In uno studio condotto in 10 aziende suinicole del Nord Italia è stata rilevata un prevalenza di infezione da TTV del 24%. Poche sono le informazioni disponibili in merito all’epidemiologia, alla patogenesi e al significato clinico dell’infezione nel suino
Detection and characterization of porcine caliciviruses in Italy.
No full textPorcine noroviruses and sapoviruses have been
sporadically reported in European countries, and more
rarely in Italy. In this study, stools samples were collected
from both asymptomatic and diarrheic pigs from northern
Italy and were screened for caliciviruses by RT-PCR.
Sapoviruses were detected frequently and were genetically
related to both the GIII reference strain and the newly
described porcine sapovirus genogroups. Porcine norovirus
was detected in one asymptomatic pig (0.5 %) and was
genotyped as GII.11. This is the first detection of porcine
norovirus in Italy
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