1,720,996 research outputs found
Definición de protocolos para el uso de fitohormonas en el crecimiento de orquídeas a nivel in vitro.
Get PDFIn this research protocols for the use of gibberellic acid (GA3), butyric indole acid (IBA)
and kinetin (Kin) were established through in vitro culture of Epidendrum jamiesonis,
Epidendrum schistochilum and Oncidium ornithorhynchum, native orchids of Ecuador.
Firstly, ideal reference concentrations were calibrated by bioassay using Solanum
lycopersicum. To establish a dynamic in the percentage of germination by adding
gibberellins, orchid seeds were sown in the Knudson C Modified Medium Plus and 130
µL of each hormone solution were added, determining the ideal concentration of 0,1 mg/L
for Epidendrum and 0,2 mg/L for Oncidium. In addition, the effect of IBA, Kin and the
combination IBA x Kin was analyzed in protocorms of the species Epidendrum jamiesonis
and Epidendrum schistochilum. These were planted in the Orchid Maintanance Medium
and 130µL of hormone solution was added. Regarding the kinetin, an ideal concentration
of 0,01 mg/L for shoot length and 0,4 mg/L for number of shoot were established. It was
also determined that the point of auxin-cytokinin balance in Epidendrum schistochilum is
7,5 mg/L IBA x 0,1 mg/L Kin, but in Epidendrum jamiesonis is 3 mg/L IBA x 0,4 mg/L
Kin. However, a better development in the number of shoot, root and leaf growth was
observed when applying the combination of hormones solution than individually.En esta investigación se estableció los protocolos para el uso de ácido giberélico (GA3),
ácido indol butírico (IBA) y kinetina (Kin) mediante el cultivo in vitro de Epidendrum
jamiesonis, Epidendrum schistochilum y Oncidium ornithorhynchum, orquídeas nativas
del Ecuador. En primera instancia se calibraron concentraciones ideales de referencia
mediante bioensayos en Solanum lycopersicum. Luego se estableció la dinámica en el
porcentaje de germinación de semillas mediante la adición de giberelinas en orquídeas, se
sembraron semillas en medio Knudson C Modificado Plus y se agregó 130 µL de cada
solución de hormonas, determinándose una concentración ideal de 0,1 mg/L para
Epidendrum y 0,2 mg/L para Oncidium. Además se analizó el efecto de IBA, Kin y la
combinación IBA x Kin en el desarrollo de protocormos de las especies Epidendrum
jamiesonis y Epidendrum schistochilum sembrados en el medio “Orchid Maintanance
Medium” adicionando 130 µL de solución de hormona. En el caso de Kin se estableció
una concentración ideal de 0,01 mg/L para longitud de brotes y 0,4 mg/L para número de
brotes. Asimismo se determinó que el punto de equilibro auxina-citoquinina en la especie
E. schistochilum es 7,5 mg/L IBA x 0,1 mg/L Kin, mientras que E. jamiesonis presenta
mejores resultados a 3 mg/L IBA x 0,4 mg/L Kin. No obstante, se definió que existe un
mejor desarrollo en cuanto al número de brotes, crecimiento radicular y foliar en la
combinación de hormonas que al aplicarlas individualmente
Estudio fitoquímico, actividad antioxidante de especies de orquídeas de los géneros epidemdrum, oncidium y caucaea
Get PDFIn the present investigation, the objective was to identify secondary metabolites in ethanolic extracts of different species of orchid genera through phytochemical screening, where tests were carried out for alkaloids, flavonoids, saponins, tannins and triterpenes. In addition, the antioxidant capacity of 35 species of orchids of the genera Caucaea, Epidemdrum and Oncidium was evaluated. For this, the DPPH method was used to analyze the free radical scavenging capacity. Vitamin C was used as a positive control for this analysis. The results determined in the phytochemical screening that the secondary metabolites that had the most presence in the species studied were flavonoids, triterpenes and saponins. The species under study of the genus Caucaea and Oncidium presented positive reaction for flavonoids and triterpenes in greater quantity, while the sample of the genus Epidendrum presented saponins in 100 %. In the analysis of antioxidant activity with DPPH methodology, the most outstanding species were Oncidium excavatum and Epidendrum nocturnun, the last species stood out because it needed a concentration of 3,50 ppm to inhibit 50 % of the free radicals of DPPH present in a solution of test.En la presente investigación se tuvo como objetivo identificar metabolitos secundarios en extractos etanólicos de distintas especies de géneros de orquídeas mediante un screening fitoquímico, en donde se realizaron pruebas para alcaloides, flavonoides, saponinas, taninos y triterpenos. Además se evaluó la capacidad antioxidante de 35 especies de orquídeas de los géneros Caucaea, Epidemdrum y Oncidium, para esto se utilizó el método DPPH para analizar la capacidad captadora de radicales libres, como control positivo para este análisis se utilizó vitamina C.
Los resultados determinaron en el screening fitoquímico que los metabolitos secundarios que más presencia tuvieron en las especies estudiadas fueron flavonoides, triterpenos y saponinas. Las especies en estudio del género Caucaea y Oncidium presentaron reacción positiva para flavonoides y triterpenos en mayor cantidad, mientras que las muestra del género Epidendrum presentaron saponinas en un 100 %.
En el análisis de actividad antioxidante con metodología DPPH, las especies más sobresalientes fueron Oncidium excavatum y Epidendrum nocturnun, la última especie se destacó por que necesitó una concentración de 3,50 ppm para inhibir el 50 % de los radicales libres de DPPH presentes en una solución de ensayo
Estandarización de un protocolo de qPCR para la identificación de la enfermedad de la mancha blanca en camarones de piscina de las provincias del Guayas y Manabí
Get PDFEl presente trabajo de titulación tuvo el propósito de realizar la estandarización de un protocolo de
qPCR para la identificación de la enfermedad de la mancha blanca en camarones de piscina de las
provincias del Guayas y Manabí, se emplearon muestras positivas de camarón que presentaban signos
y síntomas característicos de la enfermedad de interés, a su vez se tomaron muestras directamente de
las piscinas de las provincias mencionadas. Los procedimientos que se realizaron fueron la extracción
del ADN de cada individuo por diferentes métodos; la cuantificación de ADN por Qubit y NanoDrop;
la evaluación de la integridad del ADN mediante electroforesis en gel de agarosa; evaluación y
selección de primers; la amplificación por qPCR y la evaluación del protocolo. Los resultados
obtenidos indican que, se logró estandarizar adecuadamente el protocolo para la identificación de la
enfermedad de la mancha blanca, el cual se evaluó con una prueba de diluciones para conocer la
sensibilidad del protocolo en el análisis de esta enfermedad que presentan los camarones de piscinas.
Por lo tanto, se concluye que es posible la detección de mancha blanca haciendo uso de un protocolo
de qPCRThe present thesis work had the purpose of carrying out the standardization of a qPCR protocol for
the identification of white spot disease in shrimp farms in the provinces of Guayas and Manabi.
Positive samples of shrimp exhibiting characteristic signs and symptoms of the disease of interest
were used, along with samples taken directly from the pools of the mentioned provinces. The
procedures that were carried out were the extraction of the DNA of each sample by different methods;
DNA quantification by Qubit and NanoDrop; evaluation of DNA integrity by agarose gel
electrophoresis; evaluation and selection of primers; qPCR amplification and protocol evaluation.
The results obtained indicate that it was possible to adequately standardize the protocol for the
identification of the white spot disease, which was evaluated with a dilution test to know the sensitivity
of the protocol in the analysis of this disease presented by pool shrimp. Therefore, it is concluded
that White spot detection is possible using a qPCR protocol
Actividad alexítera de Lonchocarpus utilis A.C. Sm Y Mucuna cf. elliptica sobre veneno de Bothrops atrox (Pitalala).
Get PDFBites by poisonous snakes as Bothrops atrox are very common in Ecuador, especially in rural areas of the Amazon where the victims are treated, in the first instance, with plants that relieve pain according to the natives. This research evaluated the ability of extracts of Lonchocarpus utilis and Mucuna elliptica to inhibit the harmful effects of the venom of the snake pitalala on human blood.
Plant samples were collected in the cantons Morona and Huamboya in Morona Santiago province; from these, alcoholic extracts and heptanics that assayed in vitro testing of anticoagulation, antiproteolytic, antihemolytic were obtained. Furthermore by vertical electrophoresis in denaturing conditions (SDS-PAGE) polyacrylamide gel was observed change in the protein from the venom profile to be treated with vegetable extracts. Also determined the concentrations of phenolics and flavonoids by UV-VIS spectrophotometry. The results showed that the alcoholic extract of L. utilis was the most effective in increase the clotting time (> 60 seconds) and introduced greater capacity antiproteolitic; as regards the hemolytic effect only the alcoholic extract of leaves of L. utilis presented such capacity since released hemoglobin was only 19.60 %. In the protein profile as many bands appeared in L. utilis root extract which indicates that the effect of the poison is mitigated because of the components of the plant extracts.Las mordeduras por víboras venenosas como Bothrops atrox son muy frecuentes en Ecuador, especialmente en zonas rurales de la Amazonía en donde las víctimas son tratadas, en primera instancia, con plantas que según los nativos alivian el dolor. En esta investigación se evaluó la capacidad de los extractos de Lonchocarpus utilis y Mucuna elliptica para inhibir los efectos nocivos del veneno de la serpiente pitalala sobre la sangre humana.
Las muestras vegetales se recolectaron en los cantones Morona y Huamboya en la provincia Morona Santiago; a partir de estas, se obtuvo extractos alcohólicos y heptánicos con los que se ensayaron pruebas in vitro de anticoagulación, antiproteólisis, antihemólisis. Además mediante electroforesis vertical con gel de poliacrilamida en condiciones desnaturalizantes (SDS-PAGE) se observó el cambio en el perfil proteico del veneno al ser tratado con los extractos vegetales. También se determinó las concentraciones de fenoles y flavonoides mediante espectrofotometría UV-VIS. Los resultados demostraron que el extracto alcohólico de L. utilis fue el más eficaz en aumentar el tiempo de coagulación del plasma (>60 segundos) y presentó mayor capacidad antiproteolítica; en cuanto al efecto anti hemolítico solo el extracto alcohólico de hojas de L. utilis presentó dicha capacidad ya que la hemoglobina liberada fue de solo 19.60 %. En el perfil proteico aparecieron mayor cantidad de bandas en el extracto de raíz de L. utilis lo que indica que el efecto del veneno es mitigado por causa de los componentes de los extractos vegetales
Identificación molecular de especies de orquídeas del género Dracula, mediante el sistema BARCODE
Get PDFThe family (Orchidaceae) stands out as one of the most important because it contains a large number of species of high economic value; At present, within the Dracula genus around 130 species are recognized in the world and 56 species are described in Ecuador, a total of 144 individuals of Dracula were collected in different orchids within the provinces of Pichincha and Carchi, molecular identification through the BARCODE system to determine the possible existence of new species and the resolution of subgeneric problems of this genus. The absence of flowering for its morphological identification makes use of molecular techniques that allow its effective identification. We proceeded to the extraction of DNA from the species collected, then the chloroplastic regions matK, rpoC1 and rpoB were amplified using the conventional PCR technique for sequencing and finally the phylogeny of the genus was established by the MEGA 6 software. The results obtained showed that the matK region presents a good potential for discrimination up to the subsection level, the rpoC1 and rpoB markers did not prove useful for this study. Therefore it is suggested to investigate with new regions of chloroplastic and nuclear DNA that allow to solve the subgeneric inconsistencies of the genus Dracula.La familia (Orchidaceae) se destaca como una de las más importantes por contener un gran número de especies de alto valor económico; en la actualidad dentro del género Dracula se reconocen alrededor de 130 especies en el mundo y 56 especies se encuentran descritas en el Ecuador, se recolectaron un total de 144 individuos de Dracula en diferentes orquidearios dentro de las provincias de Pichincha y Carchi, se realizó una identificación molecular mediante el sistema BARCODE para determinar la posible existencia de nuevas especies y la resolución de problemas subgenéricos de este género. La ausencia de floración para su identificación morfológica hace recurrir a técnicas moleculares que permitan su eficaz identificación. Se procedió a la extracción de ADN de las especies colectadas, posteriormente se amplificaron las regiones cloroplásticas matK, rpoC1 y rpoB mediante la técnica PCR convencional para su secuenciación y finalmente se estableció la filogenia del género mediante el software MEGA 6. Los resultados obtenidos mostraron que la región matK presenta un buen potencial de discriminación hasta el nivel de subsección, los marcadores rpoC1 y rpoB no mostraron ser útiles para este estudio. Por lo cual se sugiere investigar con nuevas regiones de ADN cloroplástico y nuclear que permitan resolver las inconsistencias subgenéricas del género Dracula
Identificación molecular de plantas tóxicas con mayor incidencia en la región interandina centro norte del Ecuador
No full textLa intoxicación por consumo de especies vegetales es común en animales y el ser humano. Las plantas tóxicas son aquellas que poseen un riesgo serio de enfermar, herir, o causar la muerte del organismo que las consume. Desde el punto de vista botánico, muchas especies de plantas contienen principios activos como alcaloides, glicósidos cianogénicos, saponinas, con previsibles consecuencias tóxicas. En nuestra cultura existen especies medicinales y ornamentales que pueden ser potencialmente tóxicas por sus principios activos e incluso por su morfología pueden ser confundidas entre ellas, por ello las técnicas convencionales de identificación han permitido caracterizar taxonómicamente las especies de interés e identificar sus principios activos, sin embargo, estas técnicas pueden emplear largas jornadas de identificación, mismas que están sujetas a la apreciación del taxónomo y que en ciertos casos puede llevar a una identificación errónea.
Las técnicas moleculares actuales permiten una rápida identificación con cantidades mínimas de muestra. El objetivo del estudio consiste en generar una base de códigos de barras genéticos y conocer la eficiencia del marcador matK en la caracterización de plantas tóxicas representativas de la región andina-centro/norte del Ecuador, ya que esta sería la base para establecer un protocolo de identificación de las especies vegetales causante de diversas intoxicaciónes.
Para la generación de códigos de barra se colectaron especies vegetales de las provincias de Imbabura, Pichincha y Cotopaxi. Se amplificó y secuenció la región matK, las secuencias obtenidas fueron comparadas con las bases de datos del GenBank y BOLD Systems.
El gen matK, permitió la identificación a nivel de especies (Identidad 96%) de 21 muestras que pertenecen principalmente a la familia Solanaceae (8 especies). Las especies colectadas en la región andina-centro/norte pertenecen a los géneros Brugmansia (37,5%), Solanum (12,5%), Nicotiana (12,5%), Cestrum (12,5%), Saracha (12,5%), y Datura (12,5%).
El gen matK es un marcador que permite identificar con porcentajes altos la identidad de una especie y tiene una contribución potencial en la filogenia de la familia Solanaceae
Análisis Molecular de Hongos Fitopatógenos Causantes de Enfermedades del Cacao en Latino América
Get PDFEl cacao (Theobroma cacao) es una especie de interés comercial, sin embargo, sufre de
distintas enfermedades, las cuales afectan de gran medida el sector comercial, se ha
podido determinar qué tipo de enfermedades afectan mediante la caracterización
molecular, y el uso de marcadores específicos. Los marcadores moleculares nos permiten
analizar características fisicoquímicas del ADN al igual que la herencia establecida por
la genética. Por lo que, se han utilizado para detectar polimorfismos en diferentes
organismos. Se indicó mediante secuenciación, uso de marcadores específicos para
diferentes especies, las cepas de hongos fitopatógenos están presentes en diferentes países
exportadores de productos derivados del cacao. El trabajo busca informar sobre las
enfermedades más comunes que afectan los cultivos de cacao recopilando diferentes
estudios científicos a nivel mundial, y la determinación de la presencia de estas
enfermedades mediante métodos moleculares. Se detallan los datos relevantes, iniciando
una introducción, seguido de su fundamento teórico, donde se explican conceptos básicos
sobre la morfología y fisiología de la enfermedad, y los distintos métodos de análisis
moleculares realizados para determinar la presencia de estos.El cacao (Theobroma cacao) es una especie de interés comercial, sin embargo, sufre de
distintas enfermedades, las cuales afectan de gran medida el sector comercial, se ha
podido determinar qué tipo de enfermedades afectan mediante la caracterización
molecular, y el uso de marcadores específicos. Los marcadores moleculares nos permiten
analizar características fisicoquímicas del ADN al igual que la herencia establecida por
la genética. Por lo que, se han utilizado para detectar polimorfismos en diferentes
organismos. Se indicó mediante secuenciación, uso de marcadores específicos para
diferentes especies, las cepas de hongos fitopatógenos están presentes en diferentes países
exportadores de productos derivados del cacao. El trabajo busca informar sobre las
enfermedades más comunes que afectan los cultivos de cacao recopilando diferentes
estudios científicos a nivel mundial, y la determinación de la presencia de estas
enfermedades mediante métodos moleculares. Se detallan los datos relevantes, iniciando
una introducción, seguido de su fundamento teórico, donde se explican conceptos básicos
sobre la morfología y fisiología de la enfermedad, y los distintos métodos de análisis
moleculares realizados para determinar la presencia de estos
Desarrollo de un protocolo para extracción y fusión de protoplastos de solanum tuberosum (papa) y solanum lycopersicum (tomate)
Get PDFLa fusión de protoplastos es una técnica biotecnológica esencial que permite la
combinación de características de diferentes células, facilitando la investigación y el
desarrollo de nuevas variedades de plantas. Este estudio evalúa el impacto de diferentes
concentraciones de polietilenglicol (PEG) y niveles de pH en la eficiencia de fusión de
protoplastos. Se aplicaron cinco tratamientos: 40% PEG a pH 8, 40% PEG a pH 9, 50%
PEG a pH 8, 50% PEG a pH 9, y un control con agua, cada uno con tres repeticiones. El
conteo de protoplastos fusionados y no fusionados/muertos se realizó utilizando una
cámara de Neubauer. La identificación de las células fusionadas permitió determinar, a
través del microscopio, si son homocariontes o heterocariontes, basándose en las
diferencias morfológicas entre los protoplastos de las especies.
Los resultados mostraron que tanto la concentración de PEG como el pH tienen
un impacto significativo en la fusión de protoplastos. En particular, el tratamiento con
50% PEG y pH 9 fue el más efectivo, presentando el mayor número de protoplastos
fusionados. El análisis factorial 2x2+1 confirmó la interacción significativa entre la
concentración de PEG y el pH. El tratamiento control, sin PEG, demostró la menor
eficiencia, subrayando la importancia del PEG en la promoción de la fusión celular.
Estos hallazgos proporcionan una base sólida para la optimización de procesos de
fusión de protoplastos en aplicaciones biotecnológicas, recomendándose la utilización
de 50% PEG y pH 9 para maximizar la eficiencia de fusión.Protoplast fusion is a crucial biotechnological technique that enables the
combination of characteristics from different cells, advancing research and the
development of new plant varieties. This study evaluates the impact of varying
concentrations of polyethylene glycol (PEG) and pH levels on protoplast fusion
efficiency. Five treatments were applied: 40% PEG at pH 8, 40% PEG at pH 9, 50%
PEG at pH 8, 50% PEG at pH 9, and a control with water, each with three repetitions.
Protoplast fusion and non-fusion/dead counts were conducted using a Neubauer
chamber, allowing clear identification of fused cells due to morphological differences
between the species involved.
Results indicated that both PEG concentration and pH significantly impact
protoplast fusion. Notably, the 50% PEG at pH 9 treatment was the most effective,
yielding the highest number of fused protoplasts. A 2x2+1 factorial analysis confirmed
the significant interaction between PEG concentration and pH. The control treatment,
without PEG, demonstrated the lowest efficiency, highlighting the critical role of PEG
in promoting cell fusion. These findings provide a solid foundation for optimizing
protoplast fusion processes in biotechnological applications, with a recommendation to
use 50% PEG and pH 9 to maximize fusion efficiency
Colección de germoplasma de especies de la familia orchidaceae del cantón Santiago de Méndez - Morona Santiago
Get PDFLas amenazas antrópicas que recibe el hábitat de las orquídeas, han promovido iniciativas en pro de su conservación. Por consiguiente, el almacenamiento de semillas de orquídeas en un banco de germoplasma, constituye una herramienta biotecnológica útil para la conservación de estas especies amenazadas. El presente estudio, tuvo dos fases, una en campo y otra en laboratorio. La recolección en campo, se realizó en tres zonas del Cantón Santiago de Méndez: Copal, Tres Ranchos y La Delicia, donde se obtuvieron 50 orquídeas de 15 géneros distintos en 600m2, las mismas que fueron conservadas ex situ en un invernadero en la ciudad de Macas, hasta que sus cápsulas maduraron. Posteriormente, en el laboratorio CIVABI de la Universidad Politécnica Salesiana de Quito, las semillas se extrajeron y desecaron en campanas con sílica gel por dos días; se almacenaron las semillas de 12 especies de orquídeas en vacuntainers, a través de dos métodos: a) en refrigeración a 4ºC, más oscuridad y b) a temperatura ambiente 20 ± 2 ºC, más luz
Estudio de las propiedades antibacterianas, antioxidantes y toxicidad de cuatro especies del género Huntleya (Orchidaceae) del Ecuador.
Get PDFEn la presente investigación se tuvo como objetivo evaluar las propiedades antibacterianas, antioxidantes y toxicidad de cuatro especies del género Huntleya (Orchidaceae) del Ecuador, se partió de extractos fluidos de hojas de cada especie obtenidos con una solución 1:1 de etanol 96 ° y agua, para pruebas de bioactividad. Por espectrofotometría UV-Visible se cuantificó la cantidad de fenoles y flavonoides presentes en las muestras. La capacidad antibacteriana se analizó por la prueba de discos de Kirby-Bauer frente a diferentes cepas bacterianas. La capacidad antioxidante se determinó utilizando el método DPPH y ABTS para analizar la capacidad captadora de radicales libres. El nivel de toxicidad se evaluó frente a Nauplios de Artemia salina para determinar su Concentración Letal media (CL50).
Los resultados de cuantificación por espectrofotometría demostraron que las especies tienen presencia en bajas concentraciones de fenoles y flavonoides. Se demostró capacidad antibacteriana nula frente a Enterobacter cloacae, Enterobacter aerogenes, Staphylococcus aureus, y Escherichia coli. En el análisis de la actividad antioxidante las especies con mayor capacidad para inhibir radicales libres son, H. wallisii para DPPH y H. gustavi para ABTS. Al trabajar la prueba con Artemia salina se demuestra que H. burtii y H. gustavi tienen un grado de toxicidad medianamente alto, mientras que H. meleagris y H. wallisii son inocuos para los organismos. Como conclusión se determinó que las especies H. burtii y H. gustavi tienen capacidad antioxidante y toxicidad con las cuales se debería probar su actividad anticancerígena en cultivos celulares.The aim of this research was to evaluate the antibacterial, antioxidant and toxicity properties of four species of the genus Huntleya (Orchidaceae) of Ecuador, based on fluid extracts of leaves of each species obtained with a 1:1 solution of 96 ° ethanol and water for bioactivity tests. The amount of phenols and flavonoids present in the samples was quantified by UV-Visible spectrophotometry. The antibacterial capacity was analyzed by the Kirby-Bauer disc test against different bacterial strains. The antioxidant activity was determined using the DPPH and ABTS methods to analyze the free radical scavenging capacity. The toxicity level was evaluated against Artemia saline Nauplii to determine its average Lethal Concentration (LC50).
The results of quantification by spectrophotometry showed that Huntleya species have phenols and flavonoids in low concentrations. Null antibacterial capacity was observed against Enterobacter cloacae, Enterobacter aerogenes, Staphylococcus aureus, and Escherichia coli. For the analysis of antioxidant activity, the species with the greatest capacity to inhibit free radicals were H. wallisii for DPPH and H. gustavi for ABTS. The toxicity evaluation using Artemia salina showed that H. burtii and H. gustavi have a moderately high degree of toxicity, while H. meleagris and H. wallisii are innocuous to organisms. In conclusion, it was determined that the species H. burtii and H. gustavi have antioxidant and toxicity properties, their anticancer activity should be further evaluated in cell cultures
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