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Neuroprotection antiinflammatoire et antiischémique par modulation du protéasome
No full textL'inhibition du protéasome a un effet anti-inflammatoire en bloquant l'activation de NF-êB. Dans ce travail, nous avons étudié cette propriété anti-inflammatoire dans deux modèles animaux de maladies neurologiques: la sclérose en plaques et l'AVC. Nous avons utilisé le ritonavir, un antiprotéase du VIH et qui a des effets de modulation sur le protéasome. Ainsi l'administration du ritonavir a permis d'inhiber l'EAE modèle animal de SEP. D'autre part, un effet anti-ischémique cérébral a été obtenu ches les animaux ayant subi une occlusion de l'artère cérébrale moyenne, modèle animal d'AVC. Ces effets neuroprotecteurs ont été corrélés à une inhibition de la réponse inflammatoire chez les animaux traités. Ces résultats ouvrent des nouvelles perspectives thérapeutiques dans les maladies inflammatoires basées sur la modulation du protéasomeThe inhibition of the proteasome has an anti-inflammatory effect by blocking the activation of NF-êB. In this work, we studied this anti-inflammatory property in two animal models of neurological diseases: the multiple sclerosis and stroke. We used the ritonavir, an antiprotease of the HIV and which has effects of modulation on the proteasome. So the administration of the ritonavir allowed to inhibit the animal model EAE of MS. On the other hand, an anti-ischemic effect was obtained in animal model of stroke. These neuroprotective effects were correlated with an inhibition of the inflammatory response. These results open new therapeutic perspectives in the inflammatory diseases based on the modulation of the proteasome
Otx2, a potential therapeutic target in the fight against medulloblastoma and age related macular degeneration
No full textOTX2 (orthodenticle homeobox 2) est un facteur de transcription impliqué dans de nombreux processus développementaux tels que la mise en place de l'axe antéropostérieur et le développement du système nerveux central. Ce facteur est également retrouvé après la naissance dans certaines structures adultes dans le but de maintenir leur intégrité et leur bon fonctionnement. Ainsi, en raison de sa pléiotropie de fonctions, OTX2 est impliqué dans plusieurs pathologies.Dans le cadre de ma thèse, je m'intéresse à deux de ces pathologies : la dégénérescence maculaire liée à l'âge (DMLA) qui est une dégénérescence de la rétine, et le médulloblastome, qui est un cancer pédiatrique du cervelet.Notre laboratoire a mis en évidence qu'OTX2 est une cible thérapeutique intéressante pour ces deux pathologies qui manquent encore de thérapies efficaces et sûres. Dans le modèle murin, une augmentation du niveau d'OTX2 dans l'épithélium pigmenté de la rétine (RPE) permet de prévenir la dégénérescence des photorécepteurs caractéristique de la DMLA. À l'inverse, dans le cadre du médulloblastome, une diminution du niveau d'expression d'OTX2 contribue au contrôle de la tumorigénèse ainsi qu'à l'amélioration de la survie.Malheureusement, à ce jour, aucun régulateur chimique d'OTX2 n'a été décrit et ne peut donc être utilisé dans ces deux pathologies.Ainsi, dans la première partie de ma thèse, nous avons entrepris d'identifier, respectivement, des régulateurs positifs et négatifs d'OTX2 dans le RPE et les cellules de médulloblastome. Afin de sélectionner de telles molécules, j'ai réalisé un crible pharmacologique de 1200 composés par RT-qPCR qui m'a permis d'identifier deux composés inhibiteurs.Dans la seconde partie de ma thèse, ces deux composés ont été plus amplement analysés dans les cellules de médulloblastome afin d'étudier leur impact sur les capacités tumorigènes de ces cellules cancéreuses.Ce projet m'a ainsi permis d'identifier deux régulateurs négatifs d'OTX2. L'étude de leurs effets in vitro et in vivo m'a permis de mettre en évidence que ces molécules ont un impact sur la tumorigénèse des médulloblastomes et constituent ainsi des thérapies intéressantes pour ces tumeurs.OTX2 (orthodenticle homeobox 2) is a transcription factor involved in numerous developmental processes such as the anteroposterior axis establishment and the central nervous system development. Notably, it is expressed postnatally in the adult in several organs and acts to maintain their proper functioning. On account of its pleiotropy in terms of function, OTX2 is involved in a large set of pathologies.As part of my thesis, I focused on two of them : Age-related Macular Degeneration (AMD), which is caused by degeneration of the retina, and medulloblastoma, which is a pediatric cancer in the cerebellum; both of which still lack efficient and safe therapies as of today.Our lab showed that OTX2 can be an interesting therapeutic target for both pathologies. Indeed, in a murine model that enhancing OTX2 expression in the retinal pigment epithelium (RPE) prevents photoreceptors degeneration, a phenotype characteristic of the AMD. On the other hand, in the case of medulloblastoma, reducing OTX2 levels in the cerebellum improves tumorigenesis control and survival.Nevertheless, no chemical regulators of OTX2 that could counteract these pathologies have been described.Therefore, in the first part of my thesis, I began identifying positive and negative regulators of OTX2 in RPE and medulloblastoma cells, respectively. To select such molecules, I carried out a pharmacological screening of up to 1200 compounds by means of RTqPCR, which allowed to identify 2 negative regulators of OTX2. In the second part of my thesis, I analysed both compounds in medulloblastoma cells to study their impact on the tumorigenic abilities of these cancerous cells.Overall, this project allowed to identify two negative regulators of OTX2, which in vitro and in vivo studies showcased an impact on the tumorigenic ability of medulloblastoma cells. Thus, these compounds constitute potential therapeutic targets for this cancer
Neurofibromatosis disease modelling : development of a test study and applications for the discovery of active molecules
No full textLa neurofibromatose de type 1 (NF1) représente la maladie génétique autosomale dominante la plus fréquente en France, après la mucovisidose, avec une incidence de 1 individu sur 3500. Il s'agit d'une pathologie multi-systémique présentant un tableau clinique varié. Parmi la pléthore de symptôme, sont comptées des manifestations neurocutanées telles que les taches « café-au-lait » (zone d'hyperpigmentation localisée) et les neurofibromes (tumeurs bénignes de la gaine périphérique de la myéline) mais également des défauts osseux et des troubles cognitifs. La pénétrance de NF1 est complète mais la manifestation et la sévérité des symptômes peuvent varier d'un individu à l'autre. Le gène NF1 responsable de la maladie, localisé sur le chromosome 17, est un gène suppresseur de tumeur qui code pour la neurofibromine. Dans le but de développer un modèle cellulaire humain pertinent pour l'étude des défauts osseux associés à NF1, nous avons utilisé des cellules souches induites à la pluripotence porteuse de la mutation causale NF1 (hiPS-NF1). Dans ces travaux, nous avons montré qu'une perte d'expression de la neurofibromine dans les ostéoblastes dérivés de hiPS-NF1 reproduisait le phénotype d'ostéogénèse réduite et qu'il était possible d'améliorer la capacité des hiPS-NF1 à se différencier en ostéoblaste à l'aide de molécules pharmacologiques. Toujours dans le but de proposer un modèle cellulaire humain le plus relevant possible, nous avons développé des lignées isogéniques avec la technologie CRISPR/Cas 9 afin d'étudier l'impact d'une perte partielle ou totale de l'expression de la neurofibromine sur le phénotype osseux. En parallèle, afin de pouvoir étudier un autre phénotype associé à NF1, un protocole de différenciation de cellules de Schwann sous culture définie en utilisant des facteurs de croissance et des molécules de signalisation, a partir des hiPS a été développé. Des cellules de Schwann-like ont été obtenues en 30 jours en engagement la différenciation des cellules souches vers la crête neurale afin d'induire l'émergence de précurseurs de cellules de Schwann par l'action de molécules telles que le récepteur de type I du TGF-ß (SB431542), l'hereguline ß1, l'IGF1, le FGF2 et un activateur de WNT3a (CHIR99021). L'analyse par q-PCR montre une augmentation des marqueurs de différents stades de différenciation de la cellule de Schwann : crête neurale (SOX10, ERBB3), cellules de Schwann précurseurs (MPZ, CAD19) et cellules de Schwann immatures (S100) au bout de 30 jours de différenciation. Ces résultats ont été complétés par l'analyse protéique des cellules différenciées et par la mise en co-culture de ces cellules avec des motoneurones différenciés à partir d'hiPS. L'ensemble de ce travail a permis de valider la pertinence de l'utilisation des cellules souches pluripotentes porteuses de mutation dans la modélisation de pathologie génétique. Permettant à plus long terme la recherche de molécules actives par des approches de de criblage pharmacologique ou par des approches de thérapie cellulaire.Neurofibromatosis type 1 (NF1) is an autosomal genetic disease with an incidence of 1 in 3,500 individuals. This is a multi-systemic disorder with a plethora of various symptoms. Among with we find neurocutaneous manifestations such as "café-au-lait" spots (zone of localized hyperpigmentation) and neurofibromas (benign tumors of the peripheral sheath of myelin), but also bone defects and cognitive disorders. The penetrance of NF1 is complete but the manifestation and severity of symptoms may vary from one individual to another. The NF1 gene responsible for the disease, located on chromosome 17, is a tumor suppressor gene that encodes neurofibromin. In order to develop a relevant human cellular model for the study of bone defects associated with NF1, we used pluripotency-induced stem cells that carry the NF1 causal mutation (hiPS-NF1). In this work, we have shown that loss of neurofibromin expression in osteoblasts derived from hiPS-NF1 reproduces the reduced osteogenesis phenotype. We have also shown that pharmacological molecules can improve the ability of hiPS-NF1 to differentiate in osteoblast. In order to propose the most relevant human cell model, we have developed isogenic lines with CRISPR / Cas 9 technology to study the impact of a partial or total loss of neurofibromin on the bone phenotype. Simultaneously, a Schwann cells differentiation protocol from hiPS was developed under culture defined using growth factors and signaling molecules. Schwann-like cells were obtained in 30 days by the use of molecules such as the type I receptor TGF-β (SB431542), heregulin β1, IGF1, FGF2 and activator of WNT3a (CHIR99021). The q-PCR analysis shows an increase in Schwann cell markers: neural crest (SOX10, ERBB3), precursor Schwann cells (MPZ, CAD19) and immature Schwann cells (S100). These results were confirmed by protein analysis of the differentiated cells and by the co-culture analysis of these cells with differentiated motoneurons from hiPS. All of this work validated the relevance of pluripotent stem cells in the modeling of genetic pathology
Regenerative Medicine for Stroke – Are We There Yet?
No full textWith the development of stem cell (SC) biology, cell-based therapy has become a highly challenging field for experimental and clinical research. Among neurological disorders, stroke has pioneered the clinical application of SC. Safety concerns have prevailed for pilot clinical studies and important preclinical work is ongoing to help SC therapy reach the level of generalization. Stroke is classically divided into an acute, a subacute and a chronic phase. Each phase is defined by a complex array of events with overlapping and distinct kinetics that lead to both rapid tissue degeneration and long-lasting remodeling. Each SC type possesses intrinsic properties – transposed via cell-autonomous and non-cell-autonomous signaling – that would more specifically address some of these events. A better definition of what is expected from SC therapy in stroke might help assign SC sources to the acute or chronic phases and possibly optimize their use in the clinic.</jats:p
Transplantation de dérivés neuraux de cellules souches embryonnaires humaines dans un modèle de lésion cérébrale ischémique
No full textCette étude avait pour objectif de définir les conditions dans lesquelles les cellules souches embryonnaires (CSE) pouvaient être utilisées comme produit thérapeutique pour les lésions neurovasculaires. Nous avons dans un premier temps caractérisé le profil de différenciation d une lignée de CSE différenciées dans le lignage neural. Nous avons distingué 4 stades de différenciation, appelés progéniteurs neuraux (PGN)-précoces, -intermédiaires et-tardifs, et un dernier stade très différencié, appelé précurseurs neuronaux (PN). Les différents types de PGN et les PN ont été transplantés au niveau striatal chez des rats une semaine après occlusion unilatérale de l artère cérébrale moyenne (OACMt). Afin d analyser l impact de l environnement ischémique sur l orientation phénotypique des cellules donnée avant la transplantation, ceux-ci ont été placés dans des lésions sévères ou modérées et chez des animaux sans lésions. Nos résultats montrent que la lésion ischémique a un faible impact sur l évolution de la différenciation de cellules greffées. Seuls les PGN-précoces ont montré une sensibilité à la lésion qui se manifestait par une meilleure survie mais aussi par une plus grande incidence de tératomes. Dans les autres cas, le schéma de différenciation observé après greffe est celui attendu en fonction de la différenciation des cellules avant leur transplantation. Mis à part le stade PGN-précoce, qu il est indispensable d éviter pour la transplantation parce que générateur de tératomes, nous avons identifié un stade générateur de greffes hyperprolifératives, celui de PGN-tardifs. L hyperprolifération peut cependant être contrôlée a posteriori par un agent anti-tumoral, le Témodal®.La deuxième partie de cette étude a porté sur l utilisation de nouveaux types cellulaires, les NSC , progéniteurs développés à partir des CSEh qui représentent des produits transplantables plus homogènes, et les IPS, cellules somatiques reprogrammées en CSEh. Les résultats préliminaires seront présentés en comparaison des résultats obtenus avec les CSEh.PARIS-BIUSJ-Physique recherche (751052113) / SudocSudocFranceF
Étude d'une nouvelle molécule neuroprotectrice et optimisation d'un modèle murin d'ischémie cérébrale focale
No full textLes accidents vasculaires cérébraux (AVC) sont considérés comme la pathologie neurologique la plus sévère en terme de mortalité et d'infirmité. Elle constitue ainsi la troisième cause de mortalité dans les pays industrialisés (120000 cas par an en France), après les accidents cardiaques et les cancers, mais surtout la première cause de ahndicap acquis. Elle constitue donc un problème de santé public majeur. Un tiers des AVC est dû à l'occlusion de l'artère sylvienne modélisée chez la souris par occlusion de l'artère cérébrale moyenne (OACM) conduisant à une dégénérescence des cellules du cortex temporo-pariétal. Nous avons, dans ce modèle, étudié le comportement d'une protéase spécifique, la cathepsine B et montré qu'elle était précocement activée au cours de la première heure qui suit l'occlusion. Cette activation aboutissait à l'activation des caspases-1, -11 et -3. L'utilisation d'un inhibiteur spécifique de la cathepsine B, le CA-074, nous a permis de réduire le volume lésé à 24 heures parallèlement à une réduction de l'activité de la caspase-3. Dasn un but thérapeutique, nous avons construit des protéines chimériques contenant XIAP (puissant inhibiteur endogène des caspases), son domaine BIR2 ou ses domaines BIR3/RING précédées du domaine PTD (protein transduction domain) du VIH-1. Ce domaine permet la traversée de la barrière hémato-encéphalique ainsi que des membranes lipidiques.Cerebral ischemia is considered as the most severe neurological pathology in term of mortality and infirmity. It constitues the third cause of mortality in industrial nations (120000 cases a year in France), after the heart attacks and the cancers, but especially the first cause of acquired handicap. It thus constitutes a major public problem of health. A third party of stoke is due to the occlusion of the sylvius artery modelled to the mouse by occlusion os the middle cerebral artery (MCAO) inducing degeneracy of the temporo-parietal cortex neurons. We studied, in this model, a specific protease, the cathepsin B, and showed that it was activated prematurely during the first hour which follows the occlusion. This activation ended in the activation caspases-1, -11 and -3. The use of a specific inhibitor of the cathepsin B, the CA 074, allowed us to reduce the 24 h infarct volume at the same time as a reduction of caspase-3 activity. In a therapeutic aim, we built chimeric proteins containing XIAP (powerful endogenous inhibitor of caspases), its domain BIR2 or its domain BIR3 / RING preceded by the PTD domain (peotein transduction domain) of the HIV 1. This domain allows the crossing of the blood brain barrier as well as the lipidic membranes.PARIS12-CRETEIL BU Multidisc. (940282102) / SudocSudocFranceF
Neuroprotection antiinflammatoire et antiischémique par modulation du protéasome
No full textL'inhibition du protéasome a un effet anti-inflammatoire en bloquant l'activation de NF-êB. Dans ce travail, nous avons étudié cette propriété anti-inflammatoire dans deux modèles animaux de maladies neurologiques: la sclérose en plaques et l'AVC. Nous avons utilisé le ritonavir, un antiprotéase du VIH et qui a des effets de modulation sur le protéasome. Ainsi l'administration du ritonavir a permis d'inhiber l'EAE modèle animal de SEP. D'autre part, un effet anti-ischémique cérébral a été obtenu ches les animaux ayant subi une occlusion de l'artère cérébrale moyenne, modèle animal d'AVC. Ces effets neuroprotecteurs ont été corrélés à une inhibition de la réponse inflammatoire chez les animaux traités. Ces résultats ouvrent des nouvelles perspectives thérapeutiques dans les maladies inflammatoires basées sur la modulation du protéasomeThe inhibition of the proteasome has an anti-inflammatory effect by blocking the activation of NF-êB. In this work, we studied this anti-inflammatory property in two animal models of neurological diseases: the multiple sclerosis and stroke. We used the ritonavir, an antiprotease of the HIV and which has effects of modulation on the proteasome. So the administration of the ritonavir allowed to inhibit the animal model EAE of MS. On the other hand, an anti-ischemic effect was obtained in animal model of stroke. These neuroprotective effects were correlated with an inhibition of the inflammatory response. These results open new therapeutic perspectives in the inflammatory diseases based on the modulation of the proteasome.PARIS-EST-Université (770839901) / SudocPARIS12-Bib. électronique (940280011) / SudocSudocFranceF
Participation des caspases à la mort neuronale induite par une ischémie focale chez la souris
No full textPARIS-BIUSJ-Thèses (751052125) / SudocPARIS-BIUSJ-Physique recherche (751052113) / SudocSudocFranceF
さざなみ ： 滋賀医科大学附属図書館報 No.10 (1982.1)
No full textOthersA Propos de Bibliotheques / by Onteniente Brigitte [p.2-3]歯科口腔外科 / 佐藤匠 [p.3-4] （教室めぐり 1）外国雑誌の見直しについて [p.5-6]Parthenon [p.6] （ことばア・ラ・カルト）滋賀県内医療の現状・課題・動向 / 饗庭昭 [p.7-8] （地域の医療を考える 1）滋賀医科大学古書目録の作成を終えて / 友吉唯夫 [p.8]唐時代の医学全書 / 石黒達也 [p.9-10] （古医書へのご招待）図書館の活動（56.7.1～12.15） [p.10]othe
