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Bionanoparticles, a green nanochemistry approach
No full textBackground: In the past decade, considerable attention has been paid for the development of novel
strategies for the synthesis of different kind of nano-objects. Most of the current strategies are usually working by the use physical or chemical principles to develop a myriad of nano-objects with multiple applications. Main fields of nanotechnology applications range from catalysis, micro- and nanoelectronics (semiconductors, single electrons transistors), non-linear optic devices, photoelectrochemistry to biomedicine, diagnostics, foods and environment, chemical analysis and others. Results: Two main avenues for nanoparticles synthesis: cell-free extract and cell cultivation have been reported. The state of art of both biotechnological approaches for different type nanoparticles are reviewed in this work. Conclusions: Nanotechnology is a revolutionary field just at its onset, the trend in the next decades being its integration with the green chemistry approach. Several strategies involving exhaustive strain selection, cultivation modes, recombinant gene expression, metabolic engineering, protein re-design and re-engineering, and predictive modeling will allow to create nanobioreactors, a new nanobiotechnology arena with a high potential impact in many fields.Fil: Cauerhff, Ana. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología Aplicada. Laboratorio de Nanobiomateriales; Argentina;Fil: Castro, Guillermo Raul. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología Aplicada. Laboratorio de Nanobiomateriales; Argentina
Obtención y caracterización de anticuerpos monoclonales de isotipo IgM anti-lisozima de gallina
No full textLa inmunidad humoral es el mecanismo principal para la eliminación de microorganismos extracelulares y sus toxinas. Está mediada por anticuerpos (Acs)secretados por los linfocitos B (LB) circulantes y es la responsable del reconocimientoespecífico y la eliminación de los antígenos circulantes. La funcionalidad del sistemainmune humoral reside en su propiedad de producir un vasto rango de inmunoglobulinas distintas a partir de un repertorio genónmico limitado. En la primera etapa de la respuesta humoral primaria (primer encuentro del organismo con el antígeno foráneo), se producen anticuerpos de isotipo IgM, en unasegunda etapa se producen IgGs (IgGs tempranas). Para investigar algunos de losaspectos estructurales de las bases moleculares de la respuesta primaria hemoscaracterizado el AcMo FAAC79 y el AcMo Moi78 que reconocen en forma específicaa la lisozima de gallina (HEL). El primero fue obtenido en este plan y el segundofue producto de una fusión anterior. Ambos anticuerpos de isotipo IgM fueronpurificados a partir de LA, se ensayaron dos métodos de enriquecimiento, unode ellos fue la precipitación con agua a 4°C y otro método consistió en la precipitación con ácido bórico. Dichas IgMs fueron purificadas mediante precipitacióncon ácido bórico al 2% y exclusión molecular en FPLC, siendo éste el método que brindó mejor rendimiento. En un paso posterior se obtruvieron IgMm para estudios funcionales de afinidad frenteal antígeno mediante la técnica de biosensor a SPR. FAAC79 pudo ser caracterizadopresentando una kass de 6,35E3 M-1 S-1, una kdiss de 1.96E-3 s-1 y una KA de 1.89E6 M-1. el AcMo Moi78 no logró ser caracterizado debido a que no se pudoobtener una especie monovalente. Además hemos caracterizado sus estabilidades térmicas mediante DLS. Con el fin de establecer qué método de conservación y almacenamiento es el adecuado para los anticuerpos de isotipo IgM, hemos ensayado el agregadode trehalosa como crioprotector en el almacenamiento en solución a -20 °C y usando liofilización. Se evaluaron grado de agregación por DLS y actividad mediante ELISA. Considerando que el método de conservación tradicional es a -20°C se logró mejorar los resultados con el agregado de 0,2M de trehalosa como crioprotector y se encontró un método de conservación alternativo válidoque es la liofilización con el agregado de 0,8M de trehalosa. Además para completar la caracterización de dichos Acmos se procedió a clonary secuenciar su dominio variable mediante técnicas de Biología Molecular. Para el acMo Moi 78 hemos obtenido las secuencias de las cadenas VH y VLderivadas de las líneas germinales VH2c8, DQ52(BALB/c), JH3 y gm33, JK5respectivamente. VHMoi 78 presenta 9 mutaciones con respecto al gen VH2c8, 1de las cuales se encuentra en la juntura V-D (DQ52) y 7 inserciones (GGGGGGA) en el gen D, sin presentar mutaciones en el gen JH3. Para VL Moi 78 hemos econtrado 6 mutaciones con respecto al gen gm33, 2 de ellas en la juntura V-JK5 y 1 con respectoi al gen JK5. Desafortunadamente, no obtuvimos las secuencias codificantes para las cadenas VH y VL de FAAC79, pero fueron secuenciadas dos cadenas aberrantes derivadas de lascelulas NS0 usadas para obtener los anticuerpos monoclonales durante la fusión. Estos resultados están de acuerdo a otros previos aún no publicados por nuestro laboratorio.Fil: Molinari, Judith P.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
Exploring protein interfaces with a general photochemical reagent
No full textProtein folding, natural conformational changes, or interaction between partners involved in recognition phenomena brings about differences in the solvent-accessible surface area (SASA) of the polypeptide chain. This primary event can be monitored by the differential chemical reactivity of functional groups along the protein sequence. Diazirine (DZN), a photoreactive gas similar in size to water, generates methylene carbene (:CH2). The extreme chemical reactivity of this species allows the almost instantaneous and indiscriminate modification of its immediate molecular cage. 3H-DZN was successfully used in our laboratory for studying protein structure and folding. Here we address for the first time the usefulness of this probe to examine the area of interaction in protein-protein complexes. For this purpose we chose the complex formed between hen eggwhite lysozyme(HEWL) and themonoclonal antibody IgG1D1.3. :CH2 labeling of free HEWL or complexed with IgG1 D1.3 yields 2.76 and 2.32 mmol CH 2 per mole protein at 1 mM DZN concentration, respectively. This reduction (15%) becomes consistent with the expected decrement in the SASA of HEWL occurring upon complexation derived from crystallographic data (11%), in agreement with the known unspecific surface labeling reaction of :CH 2. Further comparative analysis at the level of tryptic peptides led to the identification of the sites involved in the interaction. Remarkably, those peptides implicated in the contact area show the highest differential labeling: H15GLDNYR21, G117TDVQAWIR 125, and G22YSLGNWVCAAK33. Thus, protein footprinting with DZN emerges as a feasible methodology useful for mapping contact regions of protein domains involved in macromolecular assemblies.Fil: Gomez, Gabriela Elena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas ; ArgentinaFil: Cauerhff, Ana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Craig, Patricio Oliver. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Goldbaum, Fernando Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Delfino, Jose Maria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas ; Argentin
Regulation of the Drosophila hypoxia-inducible factor alpha Sima by CRM1-dependent nuclear export
No full textHypoxia-inducible factor alpha (HIF-alpha) proteins are regulated by oxygen levels through several different mechanisms that include protein stability, transcriptional coactivator recruitment, and subcellular localization. It was previously reported that these transcription factors are mainly nuclear in hypoxia and cytoplasmic in normoxia, but so far the molecular basis of this regulation is unclear. We show here that the Drosophila melanogaster HIF-alpha protein Sima shuttles continuously between the nucleus and the cytoplasm. We identified the relevant nuclear localization signal and two functional nuclear export signals (NESs). These NESs are in the Sima basic helix-loop-helix (bHLH) domain and promote CRM1-dependent nuclear export. Site-directed mutagenesis of either NES provoked Sima nuclear retention and increased transcriptional activity, suggesting that nuclear export contributes to Sima regulation. The identified NESs are conserved and probably functional in the bHLH domains of several bHLH-PAS proteins. We propose that rapid nuclear export of Sima regulates the duration of cellular responses to hypoxia.Fil: Romero, Nuria Magdalena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Irisarri, Maximiliano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Roth, Peggy. Stockholms Universitet; SueciaFil: Cauerhff, Ana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Samakovlis, Christos. Stockholms Universitet; SueciaFil: Wappner, Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentin
A novel approach to ameliorate experimental milk allergy based on the oral administration of a short soy cross-reactive peptide
No full textFood allergy is on the rise, and preventive/therapeutic procedures are needed. We explored a preventive protocolfor milk allergy with the oral administration of a Gly-m-Bd-30K soy-derived peptide that contains cross-reactiveepitopes with bovine caseins. B/T-cross-reactive epitopes were mapped using milk-specific human sera andmonoclonal antibodies on overlapping and recombinant peptides of Gly-m-Bd-30K by SPOT and cell proliferationassays. Bioinformatics tools were used to characterize epitopes on the 3D-modelled molecule, and to predict thebinding to HLA alleles. The peptide was orally administrated to mice that were then IgE-sensitized to milkproteins. Immunodominant B-epitopes were mainly located on the surface of the Nt-fragment. The use of a soypeptide-containing an immunodominant cross-reactive T-epitope, along with a single B epitope, prevents IgEmediatedmilk sensitization through the induction of Th1-mediated immunity and induction of blocking IgG.The use of a safe soy-peptide may represent a promising alternative for preventing milk allergy.Fil: Candreva, Ángela María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; ArgentinaFil: Smaldini, Paola Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; ArgentinaFil: Cauerhff, Ana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Petruccelli, Silvana. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; ArgentinaFil: Docena, Guillermo H.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; Argentin
Relationship between structure, affinity and stability in the affinity maturation process of anti-lysozyme antibodies
No full textLa maduración de la afinidad es un mecanismo del sistema inmune de organismos superiores que modifica a un anticuerpo determinado con el fin de mejorar su afinidad por un antígeno determinado y así reconocerlo con mayor eficacia. Las consecuencias de la maduración de la afinidad fueron estudiadas en un sistema compuesto de dos anticuerpos monoclonales relacionados anti-lisozima, D44.1 y F10.6.6. Las mutaciones somáticas acumuladas en la región variable de F10.6.6 respecto de D44.1 produjeron cambios estructurales en el primero que incrementaron su afinidad hacia el antígeno en 700 veces. Mediante comparaciones de estructuras cristalinas, estudios cinéticos y termodinámicos de formación del complejo anticuerpo-lisozima, utilizando diversos fragmentos de anticuerpos generados en el laboratorio, se pudo determinar que la maduración de la afinidad de este sistema particular afecta la topología del sitio de combinación y la interacción en la interfaz VL-VH, la cual estabiliza al dominio variable de F10.6.6. Fue posible además identificar mediante el estudio de fragmentos de anticuerpo mutados aquellos residuos involucrados en la estabilización del dominio variable. Finalmente se postuló un mecanismo de maduración de la afinidad para el sistema D44.1-F10.6.6, donde las mutaciones introducidas actúan de modo conjunto para aumentar la afinidad y la estabilidad de F10.6.6.Affinity maturation of anti-protein antibodies is a complex mechanism of the immune system, which inserts random point mutations to a given antibody, improving its affinity towards the antigen. The affinity maturation effects were studied in a system composed of two closely related monoclonal antibodies, D44.1 and F10.6.6. Somatic mutations accumulated in the variable region of F10.6.6 modified its structure, increasing the affinity towards the antigen by 700 times related to D44.1. It was possible to observe by means of structure comparison, kinetic and thermodynamic studies of several antibody fragments, that the affinity maturation affects the topology of the combining site and improves the interacting surfaces, stabilizing the variable domain of F10.6.6. Also, the residues involved in structure stabilization were identified. Finally, an affinity maturation mechanism for this particular system was stated, in which all the mutations act as a whole, increasing both affinity and stability.Fil: Acierno, Juan Pablo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
Bionanoparticles, a green nanochemistry approach
No full textBackground: In the past decade, considerable attention has been paid for the development of novel strategies for the synthesis of different kind of nano-objects. Most of the current strategies are usually working by the use physical or chemical principles to develop a myriad of nano-objects with multiple applications. Main fields of nanotechnology applications range from catalysis, micro- and nano-electronics (semiconductors, single electrons transistors), non-linear optic devices, photo-electrochemistry to biomedicine, diagnostics, foods and environment, chemical analysis and others.
Results: Two main avenues for nanoparticles synthesis: cell-free extract and cell cultivation have been reported. The state of art of both biotechnological approaches for different type nanoparticles are reviewed in this work.
Conclusions: Nanotechnology is a revolutionary field just at its onset, the trend in the next decades being its integration with the green chemistry approach. Several strategies involving exhaustive strain selection, cultivation modes, recombinant gene expression, metabolic engineering, protein re-design and re-engineering, and predictive modeling will allow to create nanobioreactors, a new nanobiotechnology arena with a high potential impact in many fields.Facultad de Ciencias Exacta
Bionanoparticles, a green nanochemistry approach
No full textBackground: In the past decade, considerable attention has been paid for the development of novel strategies for the synthesis of different kind of nano-objects. Most of the current strategies are usually working by the use physical or chemical principles to develop a myriad of nano-objects with multiple applications. Main fields of nanotechnology applications range from catalysis, micro- and nano-electronics (semiconductors, single electrons transistors), non-linear optic devices, photo-electrochemistry to biomedicine, diagnostics, foods and environment, chemical analysis and others.
Results: Two main avenues for nanoparticles synthesis: cell-free extract and cell cultivation have been reported. The state of art of both biotechnological approaches for different type nanoparticles are reviewed in this work.
Conclusions: Nanotechnology is a revolutionary field just at its onset, the trend in the next decades being its integration with the green chemistry approach. Several strategies involving exhaustive strain selection, cultivation modes, recombinant gene expression, metabolic engineering, protein re-design and re-engineering, and predictive modeling will allow to create nanobioreactors, a new nanobiotechnology arena with a high potential impact in many fields.Facultad de Ciencias Exacta
Sequence Determinants of Quaternary Structure in Lumazine Synthase
No full textRiboflavin, an essential cofactor for all organisms, is biosynthesized in plants, fungi and microorganisms. The penultimate step in the pathway is catalyzed by the enzyme lumazine synthase. One of the most distinctive characteristics of this enzyme is that it is found in different species in two different quaternary structures, pentameric and icosahedral, built from practically the same structural monomeric unit. In fact, the icosahedral structure is best described as a capsid of twelve pentamers. Despite this noticeable difference, the active sites are virtually identical in all structurally studied members. Furthermore, the main regions involved in the catalysis are located at the interface between adjacent subunits in the pentamer. Thus, the two quaternary forms of the enzyme must meet similar structural requirements to achieve their function, but, at the same time, they should differ in the sequence traits responsible for the different quaternary structures observed. Here, we present a combined analysis that includes sequence-structure and evolutionary studies to find the sequence determinants of the different quaternary assemblies of this enzyme. A data set containing 86 sequences of the lumazine synthase family was recovered by sequence similarity searches. Seven of them had resolved three-dimensional structures. A subsequent phylogenetic reconstruction by maximum parsimony (MP) allowed division of the total set into two clusters in accord with their quaternary structure. The comparison between the patterns of three-dimensional contacts derived from the known three-dimensional structures and variation in sequence conservation revealed a significant shift in structural constraints of certain positions. Also, to explore the changes in functional constraints between the two groups, site-specific evolutionary rate shifts were analyzed. We found that the positions involved in icosahedral contacts suffer a larger increase in constraints than the rest. We found eight sequence sites that would be the most important icosahedral sequence determinants. We discuss our results and compare them with previous work. These findings should contribute to refinement of the current structural data, to the design of assays that explore the role of these positions, to the structural characterization of new sequences, and to initiation of a study of the underlying evolutionary mechanisms.Fil: Fornasari, Maria Silvina. Universidad Nacional de Quilmes; ArgentinaFil: Laplagne, Diego Andres. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Frankel, Nicolás. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Cauerhff, Ana A.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Goldbaum, Fernando Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Echave, Julián. Universidad Nacional de Quilmes; Argentin
Cross-reactivity between the soybean protein P34 and bovine caseins
No full textPurpose: Soy-based formulas are widely used as dairy substitutes to treat milk allergy patients. However, reactions to soy have been reported in a small proportion of patients with IgE-mediated milk allergies. The aim of this work was to explore whether P34, a mayor soybean allergen, is involved in this cross-reactivity. Methods: In vitro recognition of P34 was evaluated by immunoblotting, competitive ELISA and basophil activation tests (BAT) using sera from allergic patients. In vivo cross-reactivity was examined using an IgE-mediated milk allergy mouse model. Results: P34 was recognized by IgE antibodies from the sera of milk allergic patients, casein-specific monoclonal antibodies, and sera from milk-allergic mice. Spleen cells from sensitized mice incubated with milk, soy or P34 secreted IL-5 and IL-13, while IFN-γ remained unchanged. In addition, the cutaneous test was positive with cow's milk proteins (CMP) and P34 in the milk allergy mouse model. Moreover, milk-sensitized mice developed immediate symptoms following sublingual exposure to P34. Conclusions: Our results demonstrate that P34 shares epitopes with bovine casein, which is responsible for inducing hypersensitivity symptoms in milk allergic mice. This is the first report of the in vivo cross-allergenicity of P34.Fil: Candreva, Ángela María. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; ArgentinaFil: Smaldini, Paola Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; ArgentinaFil: Curciarello, Renata. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; ArgentinaFil: Cauerhff, Ana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Fermentaciones Industriales. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Fermentaciones Industriales; ArgentinaFil: Fossati, Carlos Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; ArgentinaFil: Docena, Guillermo H.. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; ArgentinaFil: Petruccelli, Silvana. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; Argentin
