BIOpreparations. Prevention, Diagnosis, Treatment (E-Journal) / БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение
Not a member yet
340 research outputs found
Sort by
Оценка неопределенности результатов измерений при определении потери в массе при высушивании биологических лекарственных препаратов
Get PDFScientific relevance. GOST ISO/IEC 17025-2019 requires testing laboratories to evaluate the measurement uncertainty of their results. Estimating the uncertainty of analytical methods intended for biologicals is a challenging task that requires time, effort, and a special approach. Measurement uncertainty estimation is of particular interest in the case of measuring loss on drying (LOD) for biologicals, since LOD testing procedures involve analysing measurements of a physical value, i.e. mass.Aim. This study aimed to estimate the measurement uncertainty of LOD determination in biological medicinal products.Materials and methods. The study examined a powdered active substance intended for a Bifidobacterium product (test sample). The authors conducted the LOD test in accordance with the State Pharmacopoeia of the Russian Federation (OFS.1.2.1.0010.15). Statistical processing of the results was performed using Microsoft Excel. To estimate the measurement uncertainty, the authors employed the bottom-up approach or used the standard deviation from testing results.Results. The authors identified the uncertainty components that affected the LOD determination results. When calculated using the bottom-up approach, the expanded uncertainty was 0.34% (coverage factor, k=2; approximate confidence level, 95%). In particular, the largest contributor to the expanded uncertainty was the uncertainty of measuring the mass of weighing bottles containing dried test samples (0.147%), whereas the smallest contributor was the uncertainty of weighing empty bottles (0.003%). When calculated using the standard deviation, the uncertainty of two parallel measurements amounted to 0.32%.Conclusions. Both approaches to calculating LOD measurement uncertainty yield comparable results. According to the uncertainty budget analysis, the uncertainty of measuring the mass of weighing bottles with dried test samples is the major contributor to the test result. For this reason, the conditions of sample preparation should be carefully controlled. The study results confirm that the LOD measurement uncertainty can be calculated using the standard deviation. Testing laboratory teams may benefit from the methods for identifying the factors influencing LOD test results and the methods for calculating the uncertainty of measurement described in this study.Актуальность. Исследование неопределенности результатов измерений, проводимых испытательными лабораториями, предусмотрено ГОСТ ISO/IEC 17025-2019. Оценивание неопределенности методик испытаний биологических лекарственных препаратов представляет собой сложную задачу, требующую особого подхода и значительных временных и трудовых ресурсов. Актуальной является оценка неопределенности измерений на примере методики определения потери в массе при высушивании биологических лекарственных препаратов, поскольку в процессе ее реализации анализируется именно результат измерения (взвешивания) физической величины — массы.Цель. Оценить неопределенность результатов измерений при определении потери в массе при высушивании биологических лекарственных препаратов.Материалы и методы. Субстанция-порошок для изготовления бифидосодержащего препарата (исследуемый образец). Испытание проводили в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи Российской Федерации ОФС.1.2.1.0010.15. Статистическую обработку результатов выполняли с использованием программы Microsoft Exсel. Расчет неопределенности проводили двумя способами: при помощи подхода «снизу вверх» и с использованием доверительного интервала.Результаты. Идентифицированы составляющие неопределенности, влияющие на результат измерения потери в массе при высушивании. Расширенная неопределенность, рассчитанная с использованием подхода «снизу вверх», составила 0,34% (коэффициент охвата k=2, уровень доверия приблизительно 95%), при этом наибольший вклад вносит неопределенность измерения массы бюкса после высушивания образца — 0,147%; наименьший вклад — неопределенность измерения массы пустого бюкса — 0,003%. Неопределенность двух параллельных измерений, рассчитанная с помощью доверительного интервала, составила 0,32%.Выводы. Два подхода к расчету неопределенности результатов измерений потери в массе при высушивании дают сопоставимые результаты. Анализ бюджета неопределенности выявил, что наибольший вклад в результат испытания вносит неопределенность измерения массы бюкса после высушивания образца, что требует тщательного контроля условий пробоподготовки. Для оценки неопределенности может быть использован способ расчета с помощью доверительного интервала. Методология анализа методики потери в массе при высушивании с точки зрения выявления факторов, влияющих на результат испытания, и представленные способы расчета неопределенности могут быть полезны специалистам испытательных лабораторий
Актуальные направления и риски применения препаратов на основе технологий редактирования генома
Get PDFScientific relevance. To date, multiple approaches to genome editing have been developed based on different genome-editing systems (GESs) and genome modifications that result in single- or double-strand DNA breaks, either in vivo or ex vivo, followed by homologous recombination or non-homologous end joining to restore the sequence. However, the use of GESs is associated with a number of potential risks arising from the complex biology of such medicinal products and the fundamental role of their target, i.e. the DNA molecule.Aim. This study analysed the most relevant trends and risks associated with medicinal products based on genome editing, the ways taken to overcome these risks, and the research methods used to identify and control the development of undesirable effects.According to the literature, the adverse effects of GESs may arise both from the methods used to deliver GES components into the cell and from the functional activity of the GES itself, which includes insufficient on-target or undesirable off-target effects. This review indicates the main risks associated with the use of GESs. Preferable strategies to mitigate the risks of using GESs include repairing DNA breaks by homologous recombination, selecting GESs and related endonucleases that have greater specificity and restriction accuracy, increasing guide RNA specificity (for CRISPR/Cas), correcting the activity of the system regulating the cell cycle and apoptosis in a controlled manner, regulating the duration of expression and persistence of GES components in cells, etc.Conclusions. The requirement to include quality, efficacy, and safety data when submitting registration dossiers for advanced therapy medicinal products prompts the discussion of the main risks associated with such products.Актуальность. В настоящее время разработано множество различных подходов к редактированию генома, основанных на применении разных систем редактирования, осуществлении модификаций генома с образованием одноцепочечных или двухцепочечных разрывов ДНК, in vivo или ex vivo, с восстановлением последовательности генома с помощью гомологичной рекомбинации или негомологичного соединения концов ДНК. Однако применение систем редактирования генома сопряжено с возможным возникновением целого ряда рисков, вследствие сложной биологии таких препаратов и фундаментального значения цели их воздействия – молекулы ДНК.Цель. Анализ актуальных направлений и рисков, связанных с применением препаратов на основе систем редактирования генома, способов снижения рисков и методов их исследования, используемых для выявления и контроля возникновения нежелательных эффектов.Обсуждение. Анализ данных литературы показал, что нежелательные эффекты от применения препаратов на основе систем редактирования генома могут быть связаны как со способами доставки компонентов системы в клетку, так и с функциональной активностью самой системы (недостаточное целевое или нежелательное нецелевое действия). В обзоре обозначены основные риски при использовании систем редактирования генома. Установлено, что для снижения рисков применения систем редактирования генома предпочтительно проведение репарации разрывов ДНК путем гомологичной рекомбинации, использование обладающих большей специфичностью и точностью рестрикции систем редактирования генома и эндонуклеаз в их составе, увеличение специфичности гРНК (для CRISPR/Cas), контролируемая коррекция активности элементов системы регуляции клеточного цикла и апоптоза, регуляция продолжительности экспрессии и персистенции компонентов систем редактирования генома в клетках и др.Заключение. Освещение основных рисков, связанных с применением этой группы препаратов, является актуальным в связи с необходимостью предоставления данных в регистрационном досье на высокотехнологичный лекарственный препарат, касающихся оценки качества, эффективности и безопасности
Характеристика чувствительности новых клеточных культур животного происхождения к вирусам Coxsackievirus B5 и Herpes simplex virus‑1
Get PDFThe increase in the number of cell cultures for virology and biotechnology enhances the chances of a successful response to threats related to outbreaks of well-known and new human infectious diseases. It is a vital task to search for cell cultures sensitive to a wide spectrum of viruses.The aim of the study was to investigate the sensitivity of new diploid animal cell cultures (fibroblasts of a foetal pig’s kidneys and larynx) to Coxsackievirus B5 (CVB5) and Herpes simplex virus-1 (HSV-1).Materials and methods. The cultures of porcine foetal kidney fibroblasts (PFKF) and porcine foetal larynx fibroblasts (PFLF) were derived from a foetus of a healthy pig by mild trypsinisation. The study determined the sensitivity of these new PFKF and PFLF cultures to the above-mentioned viruses by the cytopathic effect (CPE) expressed as a percentage. The infectious activity of CVB5 was studied using real-time polymerase chain reaction (PCR) with the determination of amplification cycle threshold values (Ct); that of HSV-1 was studied using quantitative titration of the virus-containing liquid (VCL). Infectious activity values were expressed as tissue culture 50% infective doses (TCID50).Results. The authors developed diploid PFKF and PFLF cell cultures. PFKF cells demonstrated high sensitivity to CVB5, with a CPE of 87.5±3.3% after passage 3 and a satisfactory concentration of enterovirus RNA in the VCL of 22–24 Ct . The sensitivity of PFKF cells to HSV-1 corresponded to a CPE of 92.1±5.5%. In these cells, the infectious activity of HSV-1 corresponded to 104.25 TCID50/0.2 mL. The experiments with PFLF cells showed low CPE and infectious activity values for both viruses.Conclusions. The study demonstrated high CPE values with the CVB5 (CB5-8100) and HSV-1 (HSV-1/L-2) strains as examples and confirmed the sensitivity of the new diploid PFKF cell culture to these test viruses. Thus, the PFKF cell culture offers potential applications in virology and biotechnology and may be a candidate for testing other strains of CVB5 and HSV-1.Расширение номенклатуры клеточных культур для вирусологии и биотехнологии повышает вероятность успешного реагирования на угрозы, связанные со вспышками известных и новых инфекционных заболеваний человека. Поиск восприимчивых к широкому спектру вирусов клеточных культур является актуальной задачей.Цель работы: изучить чувствительность новых диплоидных клеточных культур животного происхождения (фибробласты почки и гортани плода свиньи) к вирусам Coxsackievirus B5 (CVB5) и Herpes simplex virus-1 (HSV-1).Материалы и методы: клеточные культуры фибробластов почки и гортани плода здоровой свиноматки получены методом щадящей трипсинизации. Чувствительность новых клеточных культур фибробластов почки и гортани плода свиньи (ФППС и ФГПС) к указанным вирусам определяли по степени цитопатического действия (ЦПД), выраженной в процентном соотношении. Изучение инфекционной активности вируса CVB5 проводили методом ПЦР в режиме реального времени с оценкой относительной величины порогового цикла амплификации (Ct); HSV-1 — количественным титрованием вируссодержащей жидкости (ВСЖ), значение показателя выражали в 50% тканевой цитопатической дозе (ТЦД50).Результаты: получены диплоидные клеточные культуры ФППС и ФГПС. Выявлены высокая чувствительность клеток ФППС к вирусу CVB5 с ЦПД 87,5±3,3% на 3 пассаже и удовлетворительная концентрация энтеровирусной РНК в ВСЖ, характеризующаяся значением порогового цикла на уровне 22–24 Ct. Чувствительность клеточной культуры ФППС к HSV-1 соответствовала 92,1±5,5% ЦПД, инфекционная активность — 104,25 ТЦД50/0,2 мл. У клеток ФГПС к изучаемым вирусам определены низкие показатели ЦПД и инфекционной активности.Выводы: новая диплоидная клеточная культура ФППС с подтвержденной чувствительностью к тестируемым вирусам (CVB5 штамма CB5-8100 и HSV-1 штамма HSV-1/L-2) с высоким уровнем ЦПД имеет перспективы использования в вирусологии и биотехнологии. Клеточная культура ФГПС может быть кандидатом для тестирования других представителей CVB5 и HSV-1
Разработка и валидация методики пептидного картирования инновационного препарата ингибитора С1 эстеразы
Get PDFPeptide mapping is a key method for studying the primary structure of proteins. With its sensitivity to the slightest changes in the covalent structure of a protein, this method is applicable both to medicinal product identification at the control stage and to production process stability monitoring.The aim of the study was to develop and validate a peptide-mapping procedure for the identification of a novel highly glycosylated recombinant C1 esterase inhibitor.Materials and methods. The authors studied recombinant human C1 esterase inhibitor products and trypsin. The study involved peptide mapping using reverse-phase high-performance liquid chromatography and high-resolution mass spectrometry. The following statistics were calculated to evaluate the results: mean, standard deviation, and coefficient of variation. The validation parameters included specificity, precision, and robustness.Results. The authors tested several variants of sample preparation for tryptic digests, including additional N-glycanase treatment and complete deglycosylation, and established the optimal conditions for sample preparation and chromatographic separation of C1 esterase inhibitor peptides to obtain consistent chromatographic profiles (peptide maps). The authors identified characteristic peaks and the corresponding relative retention time and area ranges. The absolute retention time of the second (characteristic) peak was approximately 16.5–16.9 minutes. The relative retention times were 2.14–2.21 for peak 9, 2.55–2.64 for peak 12, 2.97–3.14 for peak 14, 3.11–3.29 for peak 15, and 6.20–6.63 for peak 28.Conclusions. The authors developed a peptide-mapping procedure for C1 esterase inhibitors and optimised the conditions to achieve an over 18-hour reduction in sample preparation time. This procedure met the established acceptance criteria for specificity, precision, and robustness.Пептидное картирование является одним из ключевых методов изучения первичной структуры белка. Метод чувствителен даже к малейшим изменениям в ковалентной структуре белка, что позволяет использовать его для проверки подлинности препарата на стадии контроля и мониторинга стабильности производственного процесса.Цель работы: разработка и валидация методики пептидного картирования для подтверждения подлинности инновационного высокогликозилированного рекомбинантного белка — ингибитора С1 эстеразы.Материалы и методы: рекомбинантный ингибитор С1 эстеразы человека, трипсин. Исследование проводили методом пептидного картирования с использованием обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ОФ ВЭЖХ) и метода масс-спектрометрии высокого разрешения. Результаты оценивали с применением статистических методов расчета среднего арифметического, стандартного отклонения, коэффициента вариации. Методику валидировали по показателям: специфичность, прецизионность и устойчивость.Результаты: апробированы разные варианты пробоподготовки трипсинолизатов, включая дополнительную обработку белка N-гликаназой и полное дегликозилирование. Подобраны условия пробоподготовки и хроматографического разделения пептидов ингибитора С1 эстеразы с получением стабильного профиля пептидной карты. Разработаны и определены реперные пики, а также диапазоны их относительных времен удерживания и относительной площади. Абсолютное время удерживания второго (референтного) пика составило 16,5–16,9 мин. Относительное время удерживания пика 9 — 2,14–2,21, пика 12 — 2,55–2,64, пика 14 — 2,97–3,14, пика 15 — 3,11–3,29 и пика 28 — 6,20–6,63.Выводы: разработана методика пептидного картирования ингибитора С1 эстеразы. Оптимизация условий методики позволила сократить время пробоподготовки более чем на 18 ч. Разработанная методика по валидационным характеристикам специфичности, прецизионности и устойчивости соответствовала установленным критериям приемлемости
Оценка диагностической эффективности набора реагентов для in vitro диагностики лихорадки Западного Нила методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией и гибридизационно-флуоресцентной детекцией
Get PDFWest Nile fever is a vector-borne zoonotic arbovirus infection with natural foci. Its clinical course is similar to that of acute febrile syndrome, and severe cases may result in neuroinvasive disease. Several genetic lineages (1, 2, and 4) of the West Nile virus (WNV) with different pathogenicity for humans are circulating in the Russian Federation. Therefore, it is an urgent task to develop a diagnostic reagent kit for differentiating between WNV genetic lineages and to implement the kit in clinical laboratory practice.The aim of the study was to conduct technical and clinical tests and evaluate the quality, efficacy, and safety of the Ampligen-WNV-genotype-1/2/4 diagnostic reagent kit for detecting WNV RNA and differentiating between WNV genetic lineages 1, 2, and 4 by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) with fluorescent probe-based detection.Materials and methods. The authors determined the diagnostic sensitivity and specificity of the Ampligen-WNV-genotype-1/2/4 reagent kit (Volgograd Research Institute for Plague Control, Russia) by real-time RT-PCR with 216 clinical samples and 204 biological samples. Sanger sequencing was used as a reference method. Statistical analysis of clinical test results was carried out in accordance with the Russian national standard for clinical laboratory tests (GOST R 53022.3-2008).Results. When tested with the Ampligen-WNV-genotype-1/2/4 reagent kit, real-time RT-PCR demonstrated the analytical sensitivity of 1×104 GEq/mL for the detection of WNV cDNA of genetic lineages 1, 2, and 4. The assessment of its analytical specificity showed no positive results for cDNA samples of heterologous viruses at a concentration of 1×106 GEq/mL. The diagnostic sensitivity with the reagent kit was at least 98.5%, and the diagnostic specificity was at least 99%, with 90% confidence levels for both parameters.Conclusions. The Ampligen-WNV-genotype-1/2/4 reagent kit can be recommended for use in clinical laboratory diagnostics to detect WNV RNA and differentiate between WNV genetic lineages 1, 2, and 4.Лихорадка Западного Нила — зоонозная природно-очаговая арбовирусная инфекция с трансмиссивным механизмом передачи возбудителя. Заболевание протекает в виде острого лихорадочного интоксикационного синдрома, в тяжелых случаях — с развитием нейроинфекции. Выделяют несколько генотипов (1, 2, 4) вируса Западного Нила, ВЗН (West Nile virus, WNV), циркулирующих на территории Российской Федерации и имеющих разную патогенность для человека. В связи с этим разработка и внедрение в клиническую лабораторную практику диагностического набора реагентов для дифференциации генотипов ВЗН является актуальной задачей.Цель работы: проведение технических и клинических испытаний для оценки качества, эффективности и безопасности диагностического набора реагентов «Амплиген-WNV-генотип-1/2/4» для выявления РНК и дифференциации генотипов (1, 2, 4) вируса Западного Нила методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией и гибридизационно-флуоресцентной детекцией.Материалы и методы: определение диагностической чувствительности и специфичности набора реагентов «Амплиген-WNV-генотип-1/2/4» (ФКУЗ Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора) проводили методом ОТ-ПЦР-РВ с использованием 216 образцов клинического и 204 образцов биологического материала. В качестве метода сравнения применяли секвенирование по Сенгеру. Статистическую обработку результатов клинических испытаний проводили в соответствии с ГОСТ Р 53022.3-2008.Результаты: в ходе испытаний установлено, что аналитическая чувствительность ОТ-ПЦР-РВ c набором реагентов «Амплиген-WNV-генотип-1/2/4» составила 1×104 ГЭ/мл при выявлении кДНК ВЗН генотипов 1, 2, 4. При оценке специфичности набора положительных результатов с кДНК гетерологичных вирусов в пробах с концентрацией 1×106 ГЭ/мл не выявлено. Диагностическая чувствительность набора реагентов составила не менее 98,5%, диагностическая специфичность — не менее 99%, при доверительной вероятности 90% при анализе каждого из показателей.Выводы: набор реагентов «Амплиген-WNV-генотип-1/2/4» может быть рекомендован для применения в клинической лабораторной диагностике для обнаружения РНК и дифференциации генотипов (1, 2, 4) вируса Западного Нила
Мониторинг показателей качества вакцин для профилактики туберкулеза методом контрольных карт Шухарта
Get PDFScientific relevance. The quality of medicinal products, particularly vaccines, is contingent on the stability of the manufacturing process at all stages, which can be evaluated using Shewhart charts for data obtained by monitoring the quality attributes of interest.Aim. This study evaluated the stability of the quality and manufacturing processes of the BCG and BCG-M tuberculosis vaccines using Shewhart charts.Materials and methods. This study focused on samples of the BCG tuberculosis vaccine and the BCG-M tuberculosis vaccine, a less reactogenic alternative for primary immunisation. Both vaccines were released to the market in 2019–2022. The quality of samples was assessed for stability based on their potency and total bacterial count, which are the key parameters for immunogenicity evaluation. These quality parameters were compared using test results submitted by the manufacturer and obtained at the testing centre. The authors plotted individuals charts (X-charts) and moving range charts (R-charts) in accordance with national standards GOST R 50779.42-99 and GOST R ISO 7870-2-2015.Results. The quality of the BCG and BCG-M vaccines remained stable during the entire follow-up period (2019–2022). For some periods, the retrospective analysis of R- and X-charts revealed characteristic trends meeting special cause criteria. The Pearson correlation coefficient (r) between the data submitted by the manufacturer and the data obtained at the testing centre ranged from 0.2 to 0.8.Conclusions. The Shewhart charts demonstrated that the quality parameters of the BCG and BCG-M tuberculosis vaccines tested in 2019–2022 were stable. These vaccines had stable manufacturing processes, as shown by the R- and X-charts. However, the warning signs indicated that additional measures should be taken to standardise the manufacturing processes. The findings suggest that Shewhart charts may be recommended for monitoring the production and quality of tuberculosis vaccines.Актуальность. Производство качественных лекарственных препаратов, в том числе вакцин, возможно только в условиях сохранения стабильности всех стадий технологического процесса производства. Подходом для оценки стабильности процесса производства является использование контрольных карт Шухарта, построенных по данным анализируемых показателей качества.Цель. Оценка стабильности качества туберкулезных вакцин БЦЖ и БЦЖ-М и стабильности процесса их производства с помощью контрольных карт Шухарта.Материалы и методы. Образцы вакцины туберкулезной (БЦЖ) и вакцины туберкулезной для щадящей первичной иммунизации (БЦЖ-М) серий, выпущенных в гражданский оборот в 2019–2022 гг. Стабильность качества вакцин оценивали по показателям качества «Специфическая активность» и «Общее содержание бактерий», которые являются ключевыми при оценке иммуногенности. Сравнительную оценку показателей качества вакцин проводили согласно результатам анализа, предоставленным предприятием-производителем, а также результатам, полученным при контроле качества в испытательном центре. Проводили построение контрольных карт Шухарта индивидуальных значений (Х-карта) и карт скользящих размахов (R-карта) в соответствии с ГОСТ Р 50779.42-99 и ГОСТ Р ИСО 7870-2-2015.Результаты. Показано, что качество вакцин БЦЖ и БЦЖ-М оставалось стабильным в течение всего периода наблюдения (2019–2022 гг.). Ретроспективный анализ R- и X-карт выявил наличие характерных трендов, присущих критериям для особых причин в отдельные временные промежутки исследования. Значение коэффициента корреляции Пирсона (r) между данными производителя и данными, полученными при контроле качества в испытательном центре, составило от 0,2 до 0,8.Выводы. С помощью контрольных карт Шухарта подтверждена стабильность качества туберкулезных вакцин БЦЖ и БЦЖ-М, выпущенных в 2019–2022 гг. Проведенный анализ R- и X-карт свидетельствует о стабильности процесса производства вакцин, однако наличие предупреждающих сигналов указывает на необходимость проведения дополнительных мероприятий, направленных на стандартизацию технологического процесса. Полученные результаты могут служить основанием для рекомендации применения карт Шухарта при производстве и контроле качества туберкулезных вакцин
Лекарственные препараты пыльцевых аллергенов: современные аспекты стандартизации
Get PDFScientific relevance. Pollen allergen medicines are in high demand, and their therapeutic benefits directly correlate with their standardisation. Better diagnosis and treatment of allergic diseases require state-of-the-art procedures for assessing the allergenic activity of pollen allergen products using reference standards and physicochemical testing methods.Aim. The study aimed at developing methodological approaches to the standardisation of pollen allergen products in order to shift to measuring their potency in allergenic activity units (AAU) and bring their quality in line with the requirements of the State Pharmacopoeia of the Russian Federation.Materials and methods. The study used pollen allergen reference standards by Microgen, the WHO International Standard for timothy grass (Phleum pratense) pollen extract, a gel filtration standard kit of molecular weight markers ranging from 1.35 to 670 kDa, bovine serum albumin, serum samples with specific IgE obtained from donors sensitised to the study pollen allergens, labelled anti-human IgE antibodies, and reference standards for determining residual volatile solvents by gas chromatography. The identification of in-house reference standards for the potency of pollen allergens involved Western blotting (for allergenic components). The total protein content was determined by Bradford’s assay. In addition, the authors used high-performance liquid chromatography to study protein fractions and gas–liquid chromatography to determine the content of residual organic solvents.Results. To substitute the existing method of non-specific characterisation of allergenic activity in protein nitrogen units (PNU), the authors developed and tested a new method to control allergenic activity in allergenic activity units (AAU) based on an in vitro competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) procedure developed and validated in this study. Furthermore, the authors developed and certified 15 primary in-house reference standards with allergenic activity established in AAU/mL using skin tests in vivo. The experimental data were analysed to standardise the allergenic activity of the pollen allergens manufactured by Microgen. The authors developed physicochemical methods for the certification of in-house reference standards and validated these methods in accordance with the State Pharmacopoeia of the Russian Federation. The study involved selecting chromatographic separation conditions for residual organic solvents (acetone and diethyl ether) and establishing system suitability criteria for the chromatographic system. The allergenic activity of secondary in-house reference standards was certified against that of primary in-house reference standards using competitive ELISA. Thus, the authors managed to shift to the standardisation of pollen allergen products in vitro.Conclusions. The authors developed their competitive ELISA-based method to standardise pollen allergen products by comparing the inhibition of immune responses to a product and a standard. The study demonstrated the feasibility of substituting allergenic activity quantification (in AAU) for protein nitrogen content determination (in PNU) and showed the first example of using AAU for the certification of in-house reference standards. Additionally, the authors developed and validated an analytical procedure for determining the content of residual organic solvents in pollen allergen products by gas–liquid chromatography.Актуальность. Лекарственные препараты пыльцевых аллергенов являются наиболее востребованными. Терапевтическая польза от их применения зависит от стандартизации. Для повышения эффективности диагностики и лечения аллергических заболеваний необходимы современные методы оценки специфической (аллергенной) активности лекарственных препаратов пыльцевых аллергенов с применением стандартных образцов и методов физико-химического анализа.Цель. Разработка методологических подходов к стандартизации лекарственных препаратов пыльцевых аллергенов для перехода к нормированию специфической активности в единицах аллергенной активности (ЕАА) и приведения качества препаратов в соответствие с требованиями Государственной фармакопеи Российской Федерации.Материалы и методы. Использовали стандартные образцы пыльцевых аллергенов (АО «НПО «Микроген»), стандарт ВОЗ аллергена из пыльцы тимофеевки посевной, набор стандартов для эксклюзионной хроматографии MW 1350–670000 Da, бычий сывороточный альбумин, специфические IgE-содержащие сыворотки крови от лиц, сенсибилизированных к исследуемому аллергену, меченые антитела к IgE человека, стандартные образцы летучих растворителей для газовой хроматографии. Подтверждение подлинности стандартного образца предприятия аллергенной активности аллергена (СОП ААА) проводили методом вестерн-блота (аллергенные компоненты), содержание общего белка определяли колориметрически (метод Бредфорда). Дополнительно для изучения белковых фракций применяли метод высокоэффективной жидкостной хроматографии. Количество остаточных органических растворителей в препаратах аллергенов оценивали при помощи газожидкостной хроматографии.Результаты. Вместо существующей ранее неспецифической характеристики аллергенной активности в единицах белкового азота (Protein Nitrogen Unit, PNU) был разработан и апробирован новый метод контроля специфической активности в ЕАА на основе конкурентного иммуноферментного анализа (кИФА). Разработана и валидирована методика контроля аллергенной активности in vitro на основе кИФА. Проведены разработка и аттестация 15 первичных СОП ААА с присвоением им аллергенной активности в EAA/мл по результатам тестирования методом кожных проб in vivo. Выполнен анализ экспериментальных данных с целью установления норм аллергенной активности для номенклатуры пыльцевых аллергенов, выпускаемых АО «НПО «Микроген». Разработаны и валидированы в соответствии с Государственной фармакопеей Российской Федерации физико-химические методы аттестации СОП ААА. Определены условия хроматографического разделения остаточных органических растворителей (ацетона, диэтилового эфира) и параметры пригодности хроматографической системы. Проведена аттестация вторичных СОП ААА методом кИФА по показателю аллергенной активности относительно первичных СОП, что позволило перейти к стандартизации препаратов аллергенов методом in vitro.Выводы. Разработана методология стандартизации препаратов аллергенов методом кИФА по степени ингибирования иммунологической реакции в сравнении со стандартным образцом. Обоснована целесообразность исключения показателя «Содержание белкового азота» (в единицах белкового азота, PNU) и замены его на показатель «Аллергенная активность» (в ЕАА). Полученные СОП ААА впервые на предприятии были аттестованы в ЕАА. Разработана и валидирована аналитическая методика определения количественного содержания остаточных органических растворителей в препаратах аллергенов с помощью метода газожидкостной хроматографии
Экспериментальная оценка возможности определения бактериальных эндотоксинов с помощью гель-тромб теста в вакцине брюшнотифозной Ви-полисахаридной
Get PDFScientific relevance. Currently, only the rabbit pyrogen test is used to test the Vianvac® typhoid Vi polysaccharide vaccine for pyrogenicity. As part of the product specification file, the gel-clot test for bacterial endotoxins (BE) will improve the reliability of quality control, as well as harmonise the requirements for the vaccine with the requirements outlined for this group of medicinal products by leading world pharmacopoeias.Aim. This study aimed at an experimental assessment of the applicability of the gel-clot test to the quantification of BE in the typhoid Vi polysaccharide vaccine.Materials and methods. This study used samples from 5 batches of the typhoid Vi polysaccharide vaccine (0.5 mL/dose, solution for subcutaneous injection), LAL and TAL reagents. The analysis included the gel-clot test and the pyrogenicity test according to the State Pharmacopoeia of the Russian Federation (OFS.1.2.4.0006.15 and OFS.1.2.4.0005.15, respectively).Results. According to calculations, the BE limit for the tested vaccine was 96 EU/mL, and the maximum valid dilution (MVD) was 3200. The authors determined the regulatory requirements for typhoid Vi polysaccharide vaccine quality in terms of BE (not more than 48 EU/dose). The in vitro BE tests were positive at vaccine dilutions of 1/16 to 1/32 and negative at 1/64 to 1/256. The authors selected and validated a working vaccine dilution of 1/128. The BE content measured in the tested samples ranged from 0.24 to 0.48 EU/dose. The in vivo pyrogen tests were positive at dilutions of 1/16 to 1/128 and negative at 1/256 in all experiments with samples from 5 vaccine batches at dilutions ranging from 1/16 to 1/256.Conclusions. This study has experimentally proven that the gel-clot test can quantify BE in the typhoid Vi polysaccharide vaccine. The authors have recommended introducing the gel-clot BE test in the monograph of the State Pharmacopoeia of the Russian Federation on the typhoid Vi polysaccharide vaccine (FS.3.3.1.0012.15).Актуальность. Оценка содержания пирогенных примесей в вакцине брюшнотифозной Ви-полисахаридной (Вианвак®) проводится в настоящее время только биологическим тестом на пирогенность. Определение бактериальных эндотоксинов (БЭ) с помощью гель-тромб теста и введение показателя «Бактериальные эндотоксины» в нормативную документацию на препарат позволят существенно повысить надежность контроля качества данной вакцины, а также гармонизировать требования к ней с требованиями ведущих фармакопей мира к данной группе лекарственных препаратов.Цель. Экспериментальная оценка возможности определения содержания бактериальных эндотоксинов с помощью гель-тромб теста в брюшнотифозной Ви-полисахаридной вакцине.Материалы и методы. Образцы вакцины брюшнотифозной Ви-полисахаридной (раствор для подкожного введения, 0,5 мл/доза) пяти серий; ЛАЛ-реактив; ТАЛ-реактив. Испытания проводились с использованием гель-тромб теста с учетом требований Государственной фармакопеи Российской Федерации (ОФС.1.2.4.0006.15) и теста на пирогенность согласно ОФС.1.2.4.0005.15.Результаты. Расчетное предельное содержание БЭ в испытуемой вакцине составляет 96 ЕЭ/мл, значение максимально допустимого разведения (МДР) — 3200. Установлены нормативные требования к качеству вакцины по показателю «Бактериальные эндотоксины» (не более 48 ЕЭ/доза). Выявлено наличие БЭ в разведениях препарата 1/16–1/32 и отсутствие — в разведениях 1/64–1/256. Выбрано и валидировано рабочее разведение препарата 1/128. Полученные значения содержания БЭ в исследуемых образцах находятся в диапазоне от 0,24 до 0,48 ЕЭ/доза. Испытания на пирогенность in vivo образцов пяти серий вакцины в разведениях от 1/16 до 1/256 показали, что введение животным препарата в разведениях 1/16–1/128 вызывало пирогенную реакцию, а при введении вакцины в разведении 1/256 пирогенная реакция отсутствовала во всех экспериментах.Выводы. Экспериментально доказана возможность определения бактериальных эндотоксинов в вакцине брюшнотифозной Ви-полисахаридной с помощью гель-тромб теста. Рекомендовано введение показателя «Бактериальные эндотоксины» в Государственную фармакопею Российской Федерации ФС.3.3.1.0012.15 «Вакцина брюшнотифозная Ви-полисахаридная»
Исследование фармакокинетики биотехнологических препаратов на примере моноклональных антител
Get PDFTherapeutic monoclonal antibodies (mAbs), which are developed to treat many pathologies, including cancer, autoimmune and infectious diseases, are one of the fastest growing classes of medicinal products. Given the large number of mAbs in the pipeline and continued interest from pharmaceutical companies, the mAb market is expected to continue to grow in the coming years. To maximise both the therapeutic benefit and the safety of medicinal products in this class, it is essential that their pharmacological properties be carefully characterised and understood.The aim of the study was to analyse literature data on approaches to studying the pharmacokinetics of mAbs. This review presents data on the main physicochemical and pharmacological properties of mAbs and compares them with small molecules. The article describes the influence of various factors on mAb pharmacokinetics.For example, such factors include the method of administration, hydrophilicity, and charge of the mAb, individual characteristics of the patient (body weight, plasma albumin levels, genetic characteristics, etc.), and concurrent administration of other medicinal products. The authors evaluated the role of intra- and inter-individual variability of pharmacokinetic parameters. The rapid development of this group of medicinal products and the emergence of new promising molecules are indicative of the need to study the pharmacokinetics and pharmacodynamics of mAbs in detail and to maximise both the therapeutic benefit and the safety of the medicinal products in this class.Терапевтические моноклональные антитела (МкАт) являются одним из самых быстроразвивающихся классов лекарственных средств, которые разрабатываются для лечения многих патологий, включая рак, аутоиммунные и инфекционные заболевания. Учитывая большое количество находящихся в настоящее время в разработке МкАт и сохраняющийся интерес со стороны фармацевтических компаний, ожидается, что рынок МкАт будет продолжать расти и в последующие годы. Для максимизации как терапевтической пользы, так и безопасности препаратов этого класса крайне важно, чтобы их фармакологические свойства были тщательно охарактеризованы.Цель работы — анализ литературных данных о подходах в изучении фармакокинетических параметров моноклональных антител.Представлены данные об основных физико-химических и фармакологических свойствах МкАт. Проведен сравнительный анализ характеристик МкАт и низкомолекулярных лекарственных веществ. Показано влияние на фармакокинетические параметры МкАт различных факторов, таких как способ введения, гидрофильность и заряд МкАт, индивидуальные особенности пациентов (масса тела, уровень альбумина в плазме крови, генетические особенности и др.), совместное применение с другими лекарственными средствами. Оценена роль межиндивидуальной и внутрииндивидуальной вариабельности фармакокинетических параметров МкАт. Сделан вывод о том, что в условиях стремительных темпов разработки препаратов данной группы и появления новых перспективных молекул особо важное значение приобретает необходимость подробного изучения и оптимизации фармакокинетических и фармакодинамических свойств для повышения как терапевтической пользы, так и безопасности препаратов класса МкАт
Организационно-методические проблемы производства CAR-T в Российской Федерации
Get PDFDespite their widespread clinical implementation, chimeric antigen receptor T-cell (CAR-T) therapy products, including those manufactured by industrial processes, are still not legally available or used in the Russian Federation.The aim of the study was to describe the current challenges associated with specific aspects of CAR-T manufacturing in the Russian Federation and the potential ways to overcome them.This article discusses the regulatory, legal, organisational, and methodological challenges of CAR-T manufacturing. It analyses differences in the interpretation of CAR-T therapy products under national and supranational law. According to Russian Federal Law No. 180-FZ “On Biomedical Cell Products” of 23 June 2016, CAR-T therapy products are considered biomedical cell products. However, according to Decision No. 78 of the Council of the Eurasian Economic Commission “On the Rules of Marketing Authorisation and Assessment of Medicinal Products for Human Use” of 3 November 2016, CAR-T therapy products are considered advanced therapy medicinal products (ATMPs). This article provides a detailed overview of the difficulties in obtaining starting biological materials (i.e. the inability to consider the patient as a donor) and transferring the materials for CAR-T manufacturing (i.e. the inapplicability of national law). In addition, this article describes export aspects specific to biological materials. The authors reckon that CAR-T therapy products should be categorised as ATMPs and that the corresponding active pharmaceutical ingredients, genetically modified autologous lymphocytes, should be defined as starting materials. Therefore, genetically modified autologous lymphocytes should be regulated under the requirements for starting materials for the manufacturing of active pharmaceutical ingredients that are set forth in Decision No. 77 of the Council of the Eurasian Economic Commission “On the Adoption of the Rules of Good Manufacturing Practice of the Eurasian Economic Union” of 3 November 2016. In conclusion, the authors recognise the need for national and supranational law harmonisation. For this task, it is necessary to establish expert groups that will include clinicians, legal experts, and representatives from the relevant authorities and the pharmaceutical industry.Несмотря на широкое внедрение в клиническую практику терапии Т-клетками с химерным антигенным рецептором (chimeric antigen receptor T-cell, CAR-T), на территории Российской Федерации данные препараты до сих пор официально не представлены и не используются, в том числе и произведенные промышленным (индустриальным) способом.Цель работы — описание текущих проблем, связанных с особенностями производства CAR-T в Российской Федерации, и потенциальных путей их решения.Рассмотрены трудности, связанные c регуляторными, юридическими и организационно-методическими аспектами производства CAR-T. Проанализированы расхождения в трактовке понятия CAR-T в национальном и наднациональном праве: как биомедицинского клеточного продукта согласно Федеральному закону от 23.06.2016 № 180-ФЗ «О биомедицинских клеточных продуктах» и как высокотехнологического лекарственного препарата (ВТЛП) согласно Решению Совета Евразийской экономической комиссии от 03.11.2016 № 78 «О Правилах регистрации и экспертизы лекарственных средств для медицинского применения». Подробно рассмотрены трудности на этапе получения исходного биологического материала (невозможность рассматривать пациента как донора биологического материала); на этапе передачи биологического материала для производства CAR-T (невозможность применения национального права); особенности экспорта биологического материала. По мнению авторов статьи, CAR-T следует относить к ВТЛП, активной фармацевтической субстанцией (АФС) которых являются генетически модифицированные аутологичные лимфоциты, а последние должны быть определены как «исходный материал», и к ним должны применяться требования как к исходному материалу для производства АФС, указанные в Решении Совета Евразийской экономической комиссии от 03.11.2016 № 77 «Об утверждении Правил надлежащей производственной практики Евразийского экономического союза». Сделано заключение о необходимости гармонизации национального и наднационального права, что требует формирования экспертных групп, объединяющих врачей-клиницистов, специалистов в области права, представителей профильных ведомств и фармацевтической индустрии